Уреаплазма 10 в 2

Диагностика бактериального вагиноза, ДНК количественно [реал-тайм ПЦР]

Исследование, направленное на выявление генетического материала (ДНК) микроорганизмов Lactobacillus spp., Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, для диагностики бактериального вагиноза.

Синонимы русские

Бактериальный вагиноз, ДНК , количественный анализ.

Синонимы английские

Bacterial vaginosis, DNA , quantitative, qRT-PCR.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Единицы измерения

ГЭ/мл (геномных эквивалентов на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Соскоб урогенитальный.

Общая информация об исследовании

Бактериальный вагиноз является патологическим процессом, возникающим преимущественно у женщин репродуктивного возраста и характеризующимся изменением состава и соотношения микрофлоры влагалища. Он является частой причиной патологических выделений, может быть ассоциирован с развитием воспалительных заболеваний органов малого таза у женщин и усиливает риск заражения инфекциями, передающимися половым путем. Развитие бактериального вагиноза также повышает риск развития патологий беременности: преждевременных родов, самопроизвольных абортов, низкого веса ребенка при рождении, развития послеродового эндометрита, вагинита. Следует отметить, что у 50 % женщин бактериальный вагиноз может иметь бессимптомное течение.

У здоровых женщин репродуктивного возраста общее количество микроорганизмов в вагинальном отделяемом составляет 107-109 КОЕ/мл (колониеобразующих единиц на миллилитр) и состоит из более чем 40 разнообразных видов. Преобладают палочки Додерляйна, лактобациллы (Lactobacillus spp.): L. crispatus, L. jensenii, L. acidophilus, L. brevis. Они поддерживают постоянство биохимического состава и обладают защитной функцией. Лактобациллы обладают способностью перерабатывать гликоген в молочную кислоту, продуцировать пероксид водорода, что позволяет поддерживать постоянство рН влагалища, снижая кислотность. При этом подавляется рост условно-патогенной микрофлоры. При бактериальном вагинозе отмечается дисбиоз, нарушение соотношения и увеличение роста условно-патогенных, факультативно-анаэробных, анаэробных бактерий и микоплазм. К таким микроорганизмам относятся Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, Prevotella spp., Mobiluncus spp., Ureaplasma spp. и ряд других. Снижение количества лактобактерий и избыточный рост условно-патогенных микроорганизмов приводит к нарушениям, которые могут клинически проявиться воспалением стенок влагалища – вагинитом, сопровождающимся выраженным зудом, жжением, аномальными выделениями.

Наиболее часто при бактериальном вагинозе увеличивается количество микроорганизмов: Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae. Gardnerella vaginalis относится к условно-патогенной микрофлоре влагалища, является факультативным анаэробом. Микроорганизмы выявляются у 95-99 % женщин с бактериальным вагинозом, в том числе при его рецидивирующем течении. Чрезмерное размножение гарднерелл приводит к вытеснению преобладающих во влагалище при норме Lactobacillus spp. и стимулирует избыточный рост анаэробных бактерий и микоплазм. Риск развития гарднереллеза увеличивают вагинальные спринцевания, использование внутриматочных контрацептивов и спиралей, хламидийная или гонококковая инфекция и т.д. Бактерия Atopobium vaginae является грамположительной анаэробной палочкой, выявляющейся у 99-100 % пациентов с бактериальным вагинозом. Она играет роль в развитии воспалительных заболеваний органов малого таза у женщин, часто обнаруживается при рецидивирующем бактериальном вагинозе. Обнаружение данных микроорганизмов играет важную роль в своевременной диагностике бактериального вагиноза, в том числе при его бессимптомном течении, предотвращении развития осложнений, а также в назначении правильной патогенетической терапии.

Диагностика бактериального вагиноза основана на сочетании клинических проявлений и данных лабораторного обследования. В лабораторной диагностике является важным определение видового состава микрофлоры влагалища и определение соотношения микроорганизмов. При этом определяется количество бактерий Lactobacillus spp. и других микроорганизмов.

К современным методам диагностики относится метод полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (РТ-ПЦР). Это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять генетический материал исследуемого возбудителя. Он характеризуется высокими показателями диагностической чувствительности и специфичности, быстротой получения конечного результата. Особенностью метода является возможность выявлять ДНК (дезоксирибонуклеиновую кислоту) вируса даже при малом содержании её в исследуемом биологическом материале. Метод основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка ДНК. При этом производится количественная оценка ДНК Bacteria (общее количество бактерий), Lactobacillus spp., Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae с анализом соотношения концентраций этих микроорганизмов. Метод применяется для диагностики бактериального вагиноза, в том числе при его бессимптомном течении, у женщин с патологиями беременности, с развитием воспалительных осложнений после беременности, а также при назначении и контроле проводимой терапии. При оценке результатов РТ-ПЦР выявляются фрагменты ДНК как живых, так и разрушенных микроорганизмов, поэтому результат исследования будет оставаться положительным еще в течение некоторого времени, даже если лечение было подобрано правильно.

Для чего используется исследование?

  • Для количественного выявления ДНК возбудителей Lactobacillus spp., Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae.
  • Для определения соотношения количества ДНК возбудителей Lactobacillus spp., Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae.
  • Для диагностики этиологии бактериального вагиноза и его осложнений.
  • Для назначения патогенетической терапии бактериального вагиноза и для оценки контроля проводимого лечения.

Когда назначается исследование?

  • При клинических проявлениях бактериального вагиноза (патологические выделения из влагалища, зуд, жжение), а также при его бессимптомном течении.
  • При развитии осложнений бактериального вагиноза, патологии беременности: преждевременные роды, самопроизвольные аборты, низкий вес ребенка при рождении, развитие послеродового эндометрита, вагинита.
  • При назначении и контроле проводимой терапии бактериального вагиноза.

Что означают результаты?

Референсные значения

ДНК Bacteria: более или равно 10^6 ГЭ/мл.

ДНК Lactobacillus: не менее концентрации ДНК Bacteria.

ДНК Gardnerellavaginalis: не превышает концентрацию ДНК Lactobacillus.

ДНК Atopobiumvaginae: не превышает концентрацию ДНК Lactobacillus.

Результаты выдаются с заключением врача.

Причины повышения:

  • наличие ДНК микроорганизмов Lactobacillus spp., Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae;
  • бактериальный вагиноз, вызванный нарушением соотношения возбудителей Lactobacillus spp., Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae.

Причины понижения:

  • отсутствие бактериального вагиноза, вызванного нарушением соотношения возбудителей Lactobacillus spp., Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae.



Важные замечания

  • При оценке результатов РТ-ПЦР выявляются фрагменты ДНК как живых, так и разрушенных микроорганизмов, поэтому результат исследования будет оставаться положительным еще в течение некоторого времени, даже если лечение было подобрано правильно.

Также рекомендуется

Gardnerella vaginalis, ДНК

Анализ микробиоценоза влагалища. 16 показателей, ДНК количественно

Анализ микробиоценоза влагалища. 8 показателей, ДНК количественно

Посев на Gardnerella vaginalis с определением титра и чувствительности к противомикробным препаратам

Исследование микробиоценоза влагалища с определением чувствительности к антибиотикам

Кто назначает исследование?

Гинеколог, акушер-гинеколог, уролог, терапевт, врач общей практики.

Литература

Высокотехнологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний на самых ранних стадиях. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — один из самых новых и точных способов диагностики. За его разработку ученый Кэри Муллис получил в 1993 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод хотя и считается экспериментальным, но уже широко и успешно применяется в медицине.

ПЦР-диагностика: суть подхода

Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала, например в крови.

После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.

Сферы применения метода

Диагностические возможности метода ПЦР огромны, с его помощью можно выявить самые разные инфекции. Чаще всего ПЦР-метод применяют для диагностики:

  • ВИЧ;
  • герпеса;
  • различных половых инфекций, в частности хламидиоза, уреаплазмоза, гарднереллеза, микоплазмоза и трихомониаза;
  • кандидоза;
  • гепатитов;
  • мононуклеоза;
  • листериоза;
  • цитомегаловируса;
  • туберкулеза;
  • вируса папилломы человека;
  • клещевого энцефалита.

Это далеко не полный список, метод ПЦР-анализа используется в разных областях медицины.

Преимущества и недостатки подхода

У диагностики методом ПЦР много плюсов:

Высокая чувствительность. Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а так же в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.

Универсальность. Для проведения ПЦР анализа подходит почти любой биоматериал — от крови и слюны до клеток кожи.

Широкий охват. Исследование одного образца может выявить сразу нескольких возбудителей болезни.

Оперативность. Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.

Точность. Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.

Невысокая стоимость. По цене ПЦР-анализ сравним с любыми другими лабораторными анализами крови.

Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус — высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику лучше только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.

Исследуемый биоматериал

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь. При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева. Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.

Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала. Кровь сдается натощак утром. Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер. Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.

Методы ПЦР-диагностики заболеваний

Существует немало различных методик ПЦР-диагностики: ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени — этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается — результат можно получить уже через час.

Расшифровка результатов

Для пациента результат ПЦР-анализа может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный означает, что следов враждебной ДНК не обнаружено и человек здоров. Положительный подразумевает наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни — это значит, что человек заражен и ему требуется лечение.

Нередко ПЦР-диагностика дает положительный результат, но пациент не чувствует никакого недомогания, а признаки болезни отсутствуют. Однако это означает не ошибку, а очень раннюю стадию заболевания. В этом случае необходимы дополнительные исследования и лечение. Если заболевание было диагностировано на столь ранней стадии, следует начинать терапию как можно скорее, ведь чем дальше зайдет болезнь, тем сложнее будет ее вылечить.

ПЦР-диагностика инфекций невероятно точна — она позволяет обнаружить возбудителя болезни, даже если в пробе находится всего одна-единственная молекула его ДНК. Именно это качество сделало ПЦР-анализ одним из эффективнейших диагностических инструментов как для определения наличия инфекции, так и для контроля за ходом лечения.

Результаты ПЦР и особенности их расшифровки интересуют многих людей, чьим диагнозом является подозрение на ЗППП.

Как отмечают доктора, метод обладает высокой результативностью и минимальным процентом ошибок. Поэтому зачастую используется как контрольный в диагностике инфекционных процессов.

В чем состоит суть ПЦР методики, хотят знать больные люди, и благодаря чему обеспечивается высокая вероятность получения верных результатов. Как расшифровываются полученные итоги, и есть ли связь между этим методом и другими способами диагностики?

  • Суть метода ПЦР
  • Какие материалы можно использовать для ПЦР
  • Что значит положительный результат ПЦР
  • Что значит отрицательный результат ПЦР
  • Кто из докторов выполняет расшифровку результатов ПЦР
  • Когда показатели ПЦР становятся положительными после заражения
  • Вид бланка анализов на ПЦР
  • Вероятность ошибочных итогов при ПЦР
  • Связь ПЦР с другими методиками

Суть метода ПЦР

ПЦР-методика – исследование, используемое довольно широко в современном мире. Диагностика позволяет поставить диагноз не только при инфекционных процессах, но и при генетических патологиях, некоторых онкологических недугах. Изначально ПЦР изобреталась не для применения в медицине.

В отрасль здравоохранения метод пришел из области молекулярной биологии, в которой активно использовался после своего открытия. Ученый, создавший ПЦР, получил нобелевскую премию.

Прежде чем разбираться, как расшифровывать результаты анализов ПЦР, необходимо понять, в чем основная суть методики.

На самом деле на словах все выглядит довольно просто. У пациента берется биологический материал. Затем он обрабатывается особым образом с помощью специальных химических реагентов.

Затем получившуюся смесь помещают в особую машину, которая проводит процесс амплификации.

То есть многократного умножения определенных фрагментов ДНК или РНК, что удалось выявить с помощью добавления реагентов.

Когда процесс амплификации подойдет к концу, доктору остается только идентифицировать полученные результаты, чтобы поставить верный диагноз.

Главное – проявить внимательность на этапе идентификации. Но учитывая, что сегодня большую часть работы делает компьютер, все сильно упрощается.

ПЦР отличается высокой эффективностью. Ее широко применяют для того, чтобы определять наличие в организме скрытых инфекционных процессов, которые не дают положительных серологических реакций. Также скрытые инфекции обычно нельзя выявить с помощью посева или микроскопии. Поэтому зачастую ПЦР – единственный достоверный способ постановки диагноза в этом случае.

Какие материалы можно использовать для ПЦР

Часто удачность исследования зависит от того, как и какой материал брался для выполнения анализа. Однако в случае с полимеразной цепной реакцией расшифровка результатов ПЦР исследований мало зависит от биологического материала, который брался у пациента. Гораздо большее значение имеет подготовка к обследованию с помощью метода.

В качестве материала могут служить:

  • кровь, сдаваемая в соответствии со стандартными рекомендациями из вены на локтевом сгибе
  • мокрота, собираемая при откашливании
  • налет с ротовой полости, собираемый доктором в утреннее время, пока пациент еще не завтракал и не чистил зубы
  • мазок с половых органов, дающий хорошие результаты в том случае, если больной не мочился в течение нескольких часов, отказывался от сексуальных контактов несколько дней и соблюдал ряд других рекомендаций
  • исследование мочи, при котором биоматериал также предпочтительно собирать с утра, не проводя накануне гигиену половых органов
  • биоптаты органов или тканей, получаемые с помощью специальных инструментов и др.

Как отмечают врачи, материалом для ПЦР может быть совершенно любая жидкая среда организма человека.

При выборе главное помнить о том, что предпочтение отдают той среде, где с большей долей вероятности будет присутствовать возбудитель. Например, при половых инфекциях целесообразнее брать мазок с половых органов или кровь, чем мазок из ротовой полости.

Решать вопрос о том, какие материалы используются для получения результатов ПЦР в том или ином случае, лучше всего с лечащим врачом на приеме. Доктор сделает оптимальный выбор, исходя из предполагаемого у пациента заболевания.

Что значит положительный результат ПЦР

ПЦР – метод, который может похвастаться своей высокой специфичностью.

Предположим, доктор поставил себе цель обнаружить какой-то патогенный микроорганизм в теле пациента. И если тот на самом деле присутствует в теле, он будет обнаружен. При этом спутать его с каким-либо другим патогеном благодаря уникальному коду ДНК будет невозможно.

Если ПЦР положительный, значит, в организме с вероятностью почти в 100% находится возбудитель, поиск которого проводился врачом. Ведь методика рассчитана, в отличие от многих других диагностических методов, именно на поиск самих возбудителей, а не их следов.

Как отмечают доктора, при данном исследовании вероятность случайно принять один возбудитель за другой сводится к нулю. Зато существует вероятность получения положительных результатов после терапии.

Если в организме будут оставаться обломки нуклеиновых кислот. Однозначно положительной реакция чаще всего бывает, если пациент предъявляет жалобы на какие-то конкретные симптомы инфекционного процесса. Причем результат будет сохраняться даже в течение нескольких месяцев после того, как возбудитель будет полностью побежден и удален из организма.

Что значит отрицательный результат ПЦР

Если ПЦР результат отрицательный, значительное число пациентов автоматически считают, что они здоровы.

Это практически правильное решение.

Ведь если итоги оказались отрицательными, значит фрагменты патогенного микроорганизма не были определены тест-системой. Из этого следует логичный вывод, что микроорганизма в теле нет.

Однако стоит учитывать, что несмотря на всю свою высокую чувствительность и специфичность, методика имеет определенный порог чувствительности. Если концентрация возбудителя на момент обследования не переходит границу этого порога, результат будет расцениваться, как отрицательные. Хотя на самом деле окажется ложным до поры до времени.

Доктора акцентируют особое внимание на том, что отрицательный результат не всегда означает отсутствие патологии. Чтобы на 100% быть уверенным в своем здоровье, пройти исследование повторно рекомендуется через несколько недель, а порой и месяцев.

Кто из докторов выполняет расшифровку результатов ПЦР

Часто среди пациентов звучит вопрос о том, какой врач будет проводить расшифровку ПЦР исследования.

В первую очередь необходимо запомнить, что доверять результаты стоит тому же медицинскому работнику, что первоначально давал направление на исследование.

Связана эта рекомендация с тем, что в этом случае доктор будет представлять себе, что он ожидает увидеть в анализах. Сможет грамотно интерпретировать итоги, соотнося их с клинической картиной.

Получить направление наиболее часто можно от уролога, гинеколога или венеролога. Соответственно, после получения итогов относить бланк с результатами стоит кому-то из них. Важно помнить, что ПЦР – довольно дорогой метод диагностики. Его не принято использовать просто так, без специальных показаний к обследованию.

Среди них:

  • появление специфических для ЗППП симптомов
  • обследование перед планированием беременности или процедурой искусственного оплодотворения
  • поиск причин бесплодия и другие показания

Когда показатели ПЦР становятся положительными после заражения

Часто пациенты задают на приеме у медицинского работника вопрос о том, когда результаты ПЦР крови и мазков становятся положительными после заражения. Все зависит от того, насколько быстро конкретная инфекция сможет, размножаясь, пройти пороговую для теста концентрацию в материале.

Преимуществом ПЦР является то, что порог чувствительности у теста довольно низкий. Это значит, что выявить признаки заражения можно даже в том случае, если количество возбудителя в биологическом материале будет минимальным.

Подобная особенность дает возможность постановки диагноза даже в период инкубации, когда симптомы еще полностью отсутствуют.

Однако осечка возможна и при применении ПЦР методики. Это происходит, например, если пороговая концентрация все же не успела достичь определяемых тестом значений. В этом случае велика вероятность получения далеких от правды результатов.

Вид бланка анализов на ПЦР

Вопрос о том, как выглядит бланк результатов анализов ПЦР, весьма актуален.

Как отмечают доктора, ничего сложного во внешнем виде бумаги нет. Зачастую на документе можно обнаружить название искомого возбудителя. А напротив него пометку «обнаружен» или «не обнаружен».

В первом случае пациенту рекомендуется озаботиться собственным здоровьем. Так как анализ расценивается как положительный, а человек, как зараженный. Следовательно, ему требуется терапия.

Во втором случае чаще всего состояние пациента оценивают, как здоровое, хотя могут быть и исключения. Важно помнить, что количество возбудителей, указанных на бланке, зависит во многом от того, какое конкретно вид анализа применялся.

Если проводился поиск только одного патогенного микроорганизма, в результате будет фигурировать только его название с соответствующей пометкой. Если ПЦР проводилось сразу на несколько инфекций, что тоже возможно, в бланке будет список патологий с пометками.

Сегодня в лабораториях при комплексном анализе на группу инфекций не принято выдавать на каждый патогенный микроорганизм отдельный бланк. Их все указывают на одном листе.

Вероятность ошибочных итогов при ПЦР

Часто пациенты интересуются вопросом о том, возможно ли получение ложных результатов обследования при использовании методики. К сожалению, как отмечают врачи, ошибки хоть и редко, но случаются.

Существует, например, вероятность получить ложноположительные результаты ПЦР сразу после лечения. Объясняется это очень просто.

Терапия уже окончена, возбудитель удален из организма и не может заражать новые ткани. Однако остатки ДНК или РНК еще могут циркулировать в крови или ином диагностическом материале. В этом случае тест-система будет улавливать их и воспринимать за полноценную патологию, выдавая ложноположительный итог.

Именно поэтому рекомендуется после терапии сдавать исследование несколько раз с разными промежутками времени. Только в этом случае итоги будут достаточно объективными.

Ложноотрицательные результаты анализов ПЦР после приема антибиотиков также возможны. Происходит это в том случае, если пациент, неверно используя препараты антибактериального ряда, смазал симптомы болезни.

Не позволил микроорганизму активно размножаться в теле, но при этом и не довел его уничтожение до конца. В этом случае количество возбудителей может упасть ниже пороговой концентрации чувствительности. Это и даст неверные результаты тестирования.

Связь ПЦР с другими методиками

С помощью метода ПЦР доктора нередко подтверждают или, напротив, опровергают результаты других методов обследования, используемых для диагностики ИППП.

Например, с этой целью может использоваться ИФА.

Бывает так, что ПЦР отрицательный, а ИФА положительный. Тогда больной оказывается в замешательстве относительно своего состояния.

Доктора рекомендуют не теряться, а сначала провести оба теста повторно. Если ИФА останется положительным, а ПЦР отрицательным, с большой вероятностью заболевание в организме пациента отсутствует.

Ведь иммуноферментный анализ направлен на реакцию антиген-антитело. И порой может принимать сходные по структуре антигены других возбудителей за искомый, выдавая ложноположительные результаты.

Вероятность того, что ИФА дало верный результате на второй раз, а ПЦР, напротив, выдало ошибку, например, из-за низкого титра возбудителя, сведена к минимуму. Это скорее казуистика, чем реальная клиническая практика.

Результаты ПЦР диагностики обладают высокой ценностью в диагностике большого количества различных патологий. В первую очередь методика является незаменимой при подозрении на различные ЗППП.

Если вам нужно сдать получить комментарии по результатам ПЦР, обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

  • ВИЧ
  • Гарднереллез
  • Кондиломатоз
  • Молочница
  • Сифилис
  • Трихомониаз
  • Баланопостит
  • Герпес
  • Гонорея
  • Микоплазмоз
  • Уреаплазмоз
  • Уретрит
  • Хламидиоз
  • ЗППП

В современном мире существует множество способов обнаружить возбудителей заболеваний на разных этапах развития заболевания. Одним из таких методов является PCR (метод ПЦР или полимеразная цепная реакция), позволяющий выявить инфекцию на самом раннем этапе. Буквально одна единица ДНК или РНК уже могут указать на наличие того или иного возбудителя в организме при должном уровне подготовки пациента и профессионализма лаборантов медицинского учреждения.

ПРЦ-исследование, что это такое?

Анализ на ПЦР заключается в копировании ДНК и РНК возбудителя в лабораторных условиях. Так как основным хранилищем генетической информации является ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), образованная 2 нитями, соединенными нуклеотидами, именно при множественном копировании (синтезе) этой кислоты можно установить наличие патогенного организма, если речь идет о бактерии.

Бактерии имеют свою собственную оболочку, защищающую их от внешней среды, которая нередко является агрессивной по отношению к последним. У вирусов же нет собственной оболочки (у некоторых представителей имеется нечто похожее на оболочку), а информацию в себе несет не ДНК, а РНК (рибонуклеиновые кислоты).

РНК устроены таким образом, что они встраиваются в цепи ДНК организма-переносчика и меняют их, позволяя проникать в клетки и жить за счет организма. Грубо говоря, бактерии и вирусы оставляют «отпечатки» своими ДНК и РНК, которые и выявляет анализ ПЦР. Эти «отпечатки», как и отпечатки пальцев, являются уникальными для каждого возбудителя. Поэтому ПЦР позволяет выявить заболевание на любых этапах, даже если развитие патогена происходит бессимптомно.

До широкого внедрения ПЦР в гинекологии и урологии на ИППП широко использовались методы:

  • микроскопия — окрашенные и неокрашенные препараты исследуются через микроскоп. Метод очень завязан на опытности лаборанта. Таким методом хорошо выявляются бактерии, имеющие большой размер (гарднереллы, кандиды,трихомонады,гонококки);
  • бактериология — метод заключается в выращивании возбудителей инфекции на питательном агаре, идентификации возбудителя и определения чувствительности его к антибиотикам. Долгое время считался «золотым стандартом». К минусам относят необходимость быстрой доставке материала в КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория), сроки выращивания и выяснения чувствительности к группам антибактериальных препаратов (как правило, 5-7 суток);
  • иммуноферментный анализ — Определение антител организма, возникающих в ответ на внедрение антигена возбудителем инфекции. Из плюсов стоит отметить возможность определения стадии заболевания (острая стадия сопровождается наличием IgG в сыворотке крови, хроническая – IgM.) К минусам относится невозможность определения у людей с ослабленным иммунитетом, а также специфичность ИФА. Другими словами, при наличии только результата иммуноферментного анализа, невозможно было выставить диагноз, а можно было только определить, что организм борется с какой-либо инфекцией.

Как происходит сдача анализов на ПЦР

В зависимости от материала, который забирается для проведения анализа ПЦР, существует несколько обязательных правил для пациента. Кровь сдается строго натощак утром. Мочу тоже стоит сдавать утром, первую порцию. Мокрота также сдается натощак, хотя это и необязательно. Мазки сдаются в любое время суток и имеют специфические требования. Мазок из ротоглотки также следует сдавать утром до приема пищи.

Забор материала производится сертифицированным специалистом стерильными одноразовыми инструментами. Берут анализ крови на ПЦР одноразовым стерильным шприцом, из вены забирают приблизительно 1-2 мл венозной крови для выявления таких инфекций как герпес или ВПЧ (вирус папилломы человека). Мочи достаточно 10 мл, мокроты – субстанции, размером со спичечную головку.

Для каждого вида анализа ПЦР существуют свои требования:

  • кровь, как говорилось выше, забирают из вены натощак;
  • мочу следует сдавать утром, первую порцию. Но, если забор является срочным, то достаточно сдать мочу по прошествии 2 часов после последнего мочеиспускания. Это позволит инфекции набрать необходимую критическую массу на 1 мл для более простого обнаружения патогена;
  • как берут соскоб из уретры. Первым делом обрабатывают раствором NaCl 0.9% наружное отверстие уретры. Затем, совершая циркулярные движения, зонд проводят на 2-4 см в уретру. Головку зонда, которая имеет щетинистое строение отсекают и кладут в пробирку со специальным раствором (своеобразный питательный агар для бактерий);
  • из влагалища производят мазок. Предварительно убирают секрет бартолиновых желез, затем из заднего нижнего свода влагалища специальной ватной палочкой происходит забор материала. При видимых патологических изменениях во влагалище мазок следует брать непосредственно на поврежденном участке;
  • как проводят соскоб из цервикального канала у женщин. Удалив слизь из наружных половых путей, зонд на 0,5 – 1,5 см вводят в шейку матки, совершают циркулярное движение и, не касаясь стенок влагалища, удаляют зонд из половых путей. Затем совершают действия, аналогичные соскобу из уретры;
  • из ротоглотки забор происходит натощак. Придерживая кончик языка, зондом производят мазок с задней стенки глотки, по миндалинам или по небным дужкам. Не соприкасаясь со слизистой ротовой полости и зубами, зонд выводится и отправляется на пцр-исследование;
  • из конъюнктивы, предварительно очистив физиологическим раствором гнойные выделения, производят соскоб слизистой нижнего века от латерального к медиальному краю. Веко при этом придерживается медицинским работником во избежание соприкосновения зонда со слизистой глаза и ресницами.

Подготовка к исследованию

Анализ на ПЦР является самым быстрым и достоверным способом на ранних этапах обнаружить инфекцию, но бывают и ложноположительные/ложноотрицательные результаты.

Для сохранения нервной системы как своей, так и сотрудников медицинского учреждения, следует правильно подготовиться к исследованию.

Подготовка к ПЦР у мужчин

Перед исследованием ПЦР мужчинам следует помнить, чего делать нельзя:

  • мочиться за 3 часа до исследования;
  • производить спринцевание и стерильную обработку члена;
  • мыть член мылом, содержащим антибиотик;
  • заниматься сексом за двое суток до ПЦР на ИППП;

Подготовка к ПЦР в гинекологии

Женщинам перед тем как сдать мазок на ПЦР запрещено:

  • при соскобе из уретры запрещено мочиться за 3 часа до исследования;
  • использовать вагинальные растворы с дезинфицирующими свойствами;
  • за двое суток до исследования применять суппозитории для влагалища;
  • использовать антибиотики местно, в том числе и мыло с антибиотиком;
  • занятия сексом за 48 часов до исследования;
  • применять антибиотик внутрь влагалища и уретры;
  • спринцеваться;
  • принимать антибиотики. После последнего приема антибактериального препарата должно пройти не менее 4 недель;
  • сдавать ПЦР во время менструации.

Общие сведения при исследовании мочи для мужчин и женщин

Следует сдать на анализ первую мочу утром, ее среднюю порцию. Другими словами начинать мочиться следует в унитаз. Затем остановить акт мочеиспускания, подставить под уретру баночку для сбора мочи, продолжить мочиться в течении 2-3 секунд, затем снова остановить мочеиспускание и, убрав контейнер, закончить акт мочеиспускания в унитаз.

Женщинам и мужчинам перед тем как сдать ПЦР следует хорошо вымыть наружные половые органы для исключения попадания в мочу смегмы (смесь секрета сальных желез крайней плоти) и выделений из влагалища.

Баночка для мочи должна быть стерильной. Попросите контейнер в клинике, где вы сдаете анализ, либо заранее приготовьте баночку с плотно закрывающейся крышкой и прокипятите их не менее 10 минут.

Непосредственно перед сдачей ПЦР запрещено:

  • мочиться (необходима самая первая порция мочи за день);
  • изменять количество выпитой за сутки до исследования жидкости. Это необходимо, чтобы поддерживать обычный водно-электролитный баланс организма, в котором себя комфортно чувствует потенциальный возбудитель инфекции;
  • использовать уросептики;
  • применять мыло, содержащее в себе антибиотик;
  • заниматься сексом за 12 часов до исследования;
  • при менструации желателен забор мочи уретральным катетером для исключения попадания крови в контейнер с мочой;

Если один из пунктов был нарушен:

Следует воздержаться от проведения диагностики инфекций методом ПЦР. Если же все-таки анализ был сдан, следует его повторить через двое суток. Если при использовании антисептиков и антибиотиков результат оказался «хорошим» – не стоит радоваться. Скорее всего, при наличии определенных жалоб, это ложноположительный результат.

Расшифровка результатов ПЦР

Расшифровка анализов ПЦР очень просто (см примерный бланк выше). Существует положительный и отрицательный результаты исследования. Положительный означает, что инфекция в организме есть, но это не должно наводить страх на пациента. Наоборот, это значит, что теперь можно начать лечение и вовремя остановить патоген. Отрицательный результат, соответственно, показывать отсутствие инфекции в организме.

Также не стоит забывать о ложноположительных/ложноотрицательных результатах. В медицине золотым стандартом является три одинаковых результата подряд в независимых клиниках. Стоит помнить, что в разных клиниках сама КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория) может быть одна. То есть, здания и названия будут разные, но все анализы отправляются в одну лабораторию, связывающую эти клиники. Поэтому, получив результат в одной клинике, для того, чтобы удостовериться в правильности данного результата, стоит обратиться еще в две клиники и узнать, не сдают ли они результаты в одну и ту же КДЛ.

Широкий спектр исследований

Метод ПЦР относится к группе обширных анализов. С помощью ПЦР анализа можно определить практически любое заболевание. К сожалению, это не самый дешевый метод исследования, поэтому его не назначают всем пациентам поголовно. Цены могут варьироваться в зависимости от клиники и количества исследований.

Существует полимеразная цепная реакция (анализы ПЦР) на 12 инфекций. Какие инфекции входят в ПЦР 12:

Также есть упрощенная ПЦР 6 диагностика. Она исключает уреаплазму парвум, кандиды, гонококк, IgG, IgM, герпес обоих типов.

ПЦР исследование на ВИЧ

ПЦР на ВИЧ следует выделить отдельным пунктом, так как тут существует специфический набор ограничений.

Во-первых, ПЦР на ВИЧ определяет не ДНК вируса иммунодефицита человека, а ДНК измененной вирусом клетки-лимфоцита. В нем будет храниться информация о вирусе и размножаться, создавая все больше пораженных лимфоцитов.

Сдавать анализ следует через 14 суток после известного контакта с ВИЧ-инфицированным человеком. Стоит помнить, что заразность этого вируса несколько преувеличена из-за тяжести нелеченного заболевания. Если произошел контакт через кровь, то тут шанс заразиться самый высокий, однако и он не превышает 85%. При остальных контактах вероятность заражения составляет от 1% до 10%.

При исследовании ПЦР на ВИЧ вероятность ложноположительного результата составляет около 2%, если не было нарушений среди медицинского персонала (правильно маркированная пробирка, не перепутали пробирки местами, не было загрязнения материала при вскрытии пробирки).

Длительность ПЦР может составлять от 4 часов до 7 суток, в зависимости от организованности медицинского учреждения, где происходит диагностика инфекций.

Плюсы и минусы ПЦР

При отражении плюсов ПЦР следует отметить:

  • чувствительность. Как говорилось выше, даже единичный агент, оставленный возбудителем, позволяет обнаружить инфекцию на ее ранней стадии или если она протекает скрытно;
  • широкий спектр. Например, ПЦР 6 позволяет 1 исследованием выявить целых 6 возбудителей;
  • точность. Ложные результаты при данном методе исследования имеют место быть, но их количество сведено к минимуму;
  • скорость. Как правило, пациент уже на следующий день может забрать готовый результат ПЦР исследования.
  • стоимость. ПЦР-исследование не включено в список исследований в системе ОМС. Дорогое высокоточное оборудование требует оплаты своей работы;
  • требования к соблюдению техники исследования и к профессионализму сотрудников;
  • требования к подготовке.

61-93-230. Андрофлор (соскоб из уретры)

За интерпретацией результатов исследования необходимо обратиться к врачу. Индивидуальный бланк ответа и первичная трактовка результата проводится в лаборатории автоматически. Результаты исследований выдаются в табличной форме и в виде гистограммы.

Геномная ДНК человека (ГДЧ) оценивается в абсолютных значениях, служит для подтверждения наличия в пробирке человеческого биоматериала. Минимальное пороговое значение 10/3.

Общая бактериальная масса (ОБМ) – бактериальная обсемененность биотопа – абсолютный показатель количества бактерий, с которым сравнивают все определяемые бактерий/группы бактерий, минимальное пороговое значение – 10/4.

В случае, если в образце биоматериала одновременно ОБМ и ГДЧ ниже пороговых значений, анализ микрофлоры не проводится. В этом случае рекомендуется повторить взятие биоматериала.

Транзиторная микрофлора: Lactobacillus spp. Относительный показатель, служит маркером наличия в половых путях транзиторной микрофлоры, попадающей в половые пути от половой партнерши. При диагностике острых заболеваний нижних отделов МПС может служить косвенным маркером того, что причиной заболевания является транзиторная микрофлора. Пороговое значение – 10% от ОБМ. При повышении порогового значения Lactobacillus spp. Количественно-качественная оценка микрофлоры не проводится и заключение не выдается. В этом случае требуется повторное взятие биоматериала при условии отсутствия незащищенных половых контактов в течение трех дней.

Нормофлора: Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Corynebacterium spp. Сумма количества микроорганизмов нормофлоры – относительный показатель, снижение которого трактуется как дисбиоз. Низкая общая бактериальная масса (ОБМ <10/4) биотопа при условии подтвержденного получения биоматериала (ГДЧ>10/3) трактуется\ как НОРМОЦЕНОЗ. Если нормофлора составляет большую часть ОБМ, а относительное количество УПМ ниже пороговых значений, структура микробиома оценивается как НОРМОЦЕНОЗ.

Условно-патогенные микроорганизмы (УМП). Показатель оценивается в относительных значениях. Относительное количество УМП и/или группы УМП выше пороговых значений свидетельствует об их участии в развитии дисбиоза.

Дрожжеподобные грибы: Candida spp. Показатель оценивается в абсолютных значениях, клинически значимое пороговое значение – 10/4.

Патогены: Mycoplasma genitalium, Trichomonas vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis. Качественный показатель, оценивается наличие или отсутствие микроорганизма.

Образец бланка с результатами:

Результаты ПЦР позволяют в большинстве случаев точно определить, имеются ли у человека венерические заболевания.

Это исследование обладает высокой чувствительностью и специфичностью.

Его чувствительность достигает 100% и превышает по этому показателю любые другие существующие диагностические тесты.

По специфичности ПЦР уступает только бактериологическому посеву.

Исследование может быть количественным или качественным.

Соответственно, результаты выдаются разные.

При большинстве половых инфекций проводятся качественные исследования.

Они позволяют получить ответ: да или нет.

То есть, присутствует ли возбудитель в урогенитальном тракте или его там нет.

При этом количественные показатели не определяются.

Это связано с тем, что при многих заболеваниях количество микроорганизма не имеет никакого значения в плане выбора терапевтической тактике.

Лечение проводится при выявлении даже единичных микроорганизмов.

Потому что целью терапии является полное уничтожение представителей данной микрофлоры в урогенитальной системе пациента.

На схему лечения количество бактерий или вирусов тоже не влияет.

Дозы антибиотиков назначаются одинаковые.

Длительность курса и дозировки определяются не количеством бактерий, а распространенностью и давностью инфекционного процесса, опытом предыдущих терапевтических курсов.

Примеры таких инфекций:

  • хламидиоз;
  • гонорея;
  • сифилис.

Для некоторых заболеваний нужны количественные показатели.

Потому что они влияют на врачебную тактику.

В частности, исходя из количества бактерий или вирусов, могут приниматься такие решения:

  • нужно ли пациенту лечение или достаточно динамического наблюдения;
  • какие схемы терапии должны использоваться;
  • стоит ли прекращать проводимое лечение или его нужно продолжать дальше.

Некоторые возбудители в небольших количествах не представляют большой угрозы.

В то время как при высокой концентрации способны вызывать значительные воспалительные процессы или осложнения.

Примеры заболеваний, для которых количественные результаты ПЦР имеют немаловажное значение:

  • папилломавирусная инфекция;
  • кандидоз;
  • ВИЧ.

Цели получения результатов ПЦР

Исследование выполняется с различными целями.

В основном они следующие:

1. Первичная этиологическая диагностика.

ПЦР назначается для установления вида возбудителей.

Или видов нескольких возбудителей – ведь инфекция вполне может оказаться сочетанной.

ПЦР хороша тем, что позволяет однократно взять мазок и провести исследование сразу не все возможные ЗППП.

Благодаря этому исследованию удается выявить любых микроорганизмов в урогенитальном тракте или других участках организма человека.

Но для эффективной этиотропной диагностики важно взять биоматериал именно из той зоны, где могут присутствовать микроорганизмы.

Например, при гонорее наиболее информативным будет проведение исследования уретрального соскоба.

В то время как хламидии чаще всего обнаруживаются у женщин в цервикальных образцах.

Некоторые инфекции поражают ротовую полость или прямую кишку.

Соответственно, для их обнаружения оттуда берутся мазки.

Для выявления ВИЧ и вирусных гепатитов требуются результаты ПЦР крови.

2. Установление типа или вида возбудителя.

ПЦР может проводиться как уточняющее исследование.

В том числе при уже установленном диагнозе.

Например, аногенитальные бородавки могут быть диагностированы клинически.

Для этого достаточно визуального осмотра и дерматоскопии.

После обнаружения кондилом становится очевидным, что человек заражен папилломавирусом.

Казалось бы, этиотропная диагностика не нужна.

Но в действительности нужно получить результаты ПЦР в такой ситуации.

Потому что типов папилломавируса существуют десятки.

Необходимо выяснить, какой конкретно тип спровоцировал инфекционное заболевания у данного пациента.

Потому что типы бывают различными по степени онкологического риска.

Он может быть низким, средним или высоким.

Соответственно, совершенно отличается тактика ведения пациента.

Если выявляются низко- или среднеонкогенные типы ВПЧ, то дальнейшее наблюдение за человеком не требуется.

Он повторно возвращается в клинику разве что в случае рецидива аногенитальных бородавок для их удаления.

Но в случае обнаружения ВПЧ высокого онкогенного риска терапевтическая тактика становится совершенно другой.

За человеком устанавливается наблюдение.

Особенно если это женщина, ведь у неё значительно возрастает риск цервикального рака.

Пациента каждые полгода обследуется.

Она сдает:

  • мазки на онкоцитологию;
  • ПЦР на ВПЧ с вирусной нагрузкой;
  • по показаниям – проходит кольпоскопию, а по её результатам может быть выполнена биопсия.

Оценивается иммунный статус.

Проводится иммунокоррекция.

А в случае необходимости выполняются деструктивные процедуры для удаления очагов патологически измененного эпителия шейки матки.

То же самое касается кандидоза.

Диагноз может быть установлен с помощью одной только микроскопии, а то и клинически.

Но выявление вида грибка помогает подобрать более эффективное лечение.

Потому что только Кандида альбиканс хорошо восприимчива к традиционно используемому флуконазолу.

Другие виды грибков могут не реагировать на такое лечение.

В результате кандидоз может стать рецидивирующим.

Чтобы этого не произошло, делают ПЦР на 8 видов грибков.

Определяется точный вид кандиды и проводится целенаправленная терапия.

3. Определение количества микроорганизмов.

Может потребоваться даже при установленном этиологическом диагнозе.

К примеру, если выявлено, что у человека в репродуктивной системе присутствует папилломавирус, это ещё не означает, что ему необходимо лечение.

Потому что при низкой вирусной нагрузке даже онкогенные типы относительно безопасны.

Исследование проводится через каждые несколько месяцев.

Если количественная ПЦР показывает увеличение вирусной нагрузки, назначается лечение.

Данное исследование является одним из основных методов контроля течения ВИЧ-инфекции.

Наряду с показателями работы иммунной системы результаты ПЦР определяют:

  • когда нужно назначить антиретровирусную терапию;
  • какие дозировки препаратов необходимы;
  • сколько должно быть препаратов и какие;
  • реагирует ли человек на лечение;
  • какой у него риск осложнений и т.д.

Количественная ПЦР позволяет оценить динамику заболевания.

При возрастании вирусной нагрузки прогноз болезни оценивается как неблагоприятный.

Если же количество ДНК ВИЧ снижается, это говорит о том, что лечение проходит успешно.

4. Оценка успешности терапии.

Как качественные, так и количественные исследования ПЦР применяются для контроля результативности терапии.

Мы только что приводили пример с ВИЧ-инфекцией.

Снижение вирусной нагрузки, особенно до неопределяемой, говорит о том, что терапия проходит удачно.

Схему в этом случае не меняют.

ПЦР проводится снова и снова.

Если вирусная нагрузка начинает увеличиваться, это может означать развитие резистентности к некоторым лекарствам.

В таком случае их заменяют другими.

После коррекции схему её работоспособность снова оценивается по ряду показателей, включая вирусную нагрузку.

Результаты качественной ПЦР используются для подтверждения излеченности большинства венерических заболеваний.

Исключение составляет только сифилис – его излеченность подтверждается с помощью серологических исследований (анализов крови на антитела).

Для остальных инфекций ПЦР остается предпочтительным методом контроля.

Этот анализ сдают после терапии гонореи, хламидиоза, уреаплазмоза и других ЗППП.

Показания к ПЦР

ПЦР на половые инфекции выполняются пациентам, которые:

  • жалуются на симптомы со стороны урогенитального тракта;
  • вступали в половые контакты с потенциальным или установленным источником венерических инфекций;
  • желают обследоваться с профилактической целью (для раннего выявления и лечения венерических заболеваний до возникновения осложнений);
  • обследуются по поводу бесплодия;
  • планируют лечение бесплодия, в частности с использованием вспомогательных репродуктивных технологий;
  • планируют операции на репродуктивных органах (все венерические болезни должны быть выявлены и пролечены для снижения риска инфекционных осложнений).

Как мы уже выяснили, ПЦР выполняется не только для первичной диагностики.

Поэтому показаниями для получения результатов этого исследования также являются:

  • прохождение курса терапии по поводу венерического заболевания;
  • ВИЧ-позитивный статус (исследования проводятся регулярно для оценки последствий заболевания, особенностей его течения, назначения и коррекции антиретровирусной терапии);
  • наличие папиллом на половых органах (для оценки риска рака);
  • выявление ЗППП другими методами, например с помощью микроскопии или бак посева (показано обследование методом ПЦР на сопутствующие инфекции).

Нередко ПЦР делают пациентам в случае неудач в лечении тех или иных заболеваний.

Например, если терапия кандидоза не приносит успеха, необходимо исследование для определения вида грибка.

Исходя из этой информации, врач сможет подобрать более эффективную схему медикаментозной терапии.

Положительный анализ ПЦР – что это значит?

В большинстве случаев интерпретация ПЦР не представляет затруднений.

Особенно если выдаются качественные результаты ПЦР диагностики.

Но всё же некоторые пациенты путаются в понятиях.

Когда врач им говорит, что результат исследования ПЦР положительный, они воспринимают эту новость с радостью.

Потому что слово «положительный» ассоциируется с чем-то хорошим, благоприятным.

Но на самом деле всё обстоит совсем наоборот.

Позитивность означает присутствие в организме определенного возбудителя.

Поэтому после положительный результат означает, что вам будет назначено лечение.

Если же он отрицательный, это действительно повод для того, чтобы обрадоваться.

Потому что такой результат значит, что инфекции, на которую проводилось исследование, у вас нет.

Когда сдаются ПЦР анализы

Чтобы результаты ПЦР были максимально достоверными, сдавать их нужно не раньше, чем начнется интенсивное выделение возбудителя во внешнюю среду.

Обычно на обследование идут либо после появления симптомов, либо через 2 недели после незащищенного полового акта.

ПЦР может дать положительный результат и раньше: часто его получают уже через несколько дней после заражения.

Но если слишком поторопиться, возрастает вероятность ложноотрицательного результата.

Потому что бактериальных клеток или вирусных частиц в структурах урогенитального тракта ещё мало.

Они могут не попасть в соскоб в достаточном для определения количестве.

В случае появления симптоматики делать ПЦР можно сразу.

С высокой вероятностью исследование даст положительный результат.

Как выглядит бланк результатов ПЦР анализов

Бланк результатов в основном выглядит как таблица.

В ней указаны строки с наименованиями инфекций, на которые проводится обследование.

Указаны не названия заболеваний, а конкретные виды микроорганизмов.

Например:

  • Хламидия трахоматис;
  • Гарднерелла вагиналис;
  • Кандида альбиканс и т.д.

В столбцах напротив соответствующих видов указаны:

  • результаты анализа (обнаружено, не обнаружено, либо количественные значения);
  • единицы измерения (обычно копии ДНК на мл);
  • референсные значения (то есть, норма – какие показатели должны быть у здоровых людей).

Указание референсных значений необходимо, так как некоторые микроорганизмы, определяемые в ходе ПЦР, могут присутствовать в урогенитальном тракте в норме.

К примеру, может проводиться исследование на лактобактерии, которые составляют основу биоценоза здоровой женщины.

Если же диагностируется кандидоз, то нормальным считается наличие грибков в количестве 10 в 3 степени копий ДНК и меньше.

Противоречия результатов ПЦР и ИФА

Бывают случаи, когда разные исследования дают противоречивые результаты.

Например, ПЦР отрицательный, антитела – положительный.

Наиболее частая причина такого явления состоит в том, что бактерии действительно нет в урогенитальном тракте.

Антитела обнаруживаются из-за перенесенной в прошлом инфекции.

В целом ИФА не обладает высокой специфичностью.

Ложноположительные результаты не являются редкостью для этого теста.

Но возможна и обратная ситуация.

Отрицательный ПЦР может оказаться ложным.

Например, если мазок взят не из того участка тела, где обитают бактерии.

К примеру, пациент страдает орофарингеальной гонореей.

У него гонококки обитают во рту, а мазок для ПЦР взяли из уретры.

Естественно, результаты покажут, что никаких гонококков нет.

Но в крови появятся антитела, поэтому ИФА будет положительным.

Теперь рассмотрим обратную ситуацию.

ПЦР показывает наличие инфекции, но антител нет.

Причин может быть несколько:

  • исследование проведено слишком рано, антитела ещё не успели синтезироваться;
  • патоген обладает низкой иммуногенностью (например, при кандидозе иммуноглобулины появляются лишь в случае осложнений);
  • произошло загрязнение исследуемого материала, в него попали бактерии, которые были обнаружены в ходе ПЦР (такое случается очень редко).

Если ПЦР и ИФА вступают в противоречие, то доверять нужно скорее ПЦР.

Потому что эта методика более точная.

Ложноположительные и ложноотрицательные результаты встречаются очень редко.

Ложноотрицательный тест возможен, если инфекция была недавно пролечена.

Потому что в ходе ПЦР определяется ДНК не только живых, но и погибших микроорганизмов.

Но в этом случае противоречия с ИФА обычно не наблюдается.

Потому что антитела в крови сохраняются длительное время после завершения курса терапии ЗППП.

Какой врач проводит расшифровку ПЦР исследований

При необходимости сделать ПЦР и расшифровать результаты, обращайтесь в нашу клинику.

Здесь работают опытные венерологи.

ПЦР – один из наиболее часто используемых тестов в нашем медицинском учреждении.

Наши преимущества:

  • безболезненное взятие мазков для ПЦР по авторской методике;
  • материал отправляется в лучшие лаборатории города, что обеспечивает высокую точность и достоверность проводимых исследований;
  • возможность анонимной диагностики.

После интерпретации полученных результатов доктор либо констатирует отсутствие инфекций, либо подберет необходимое лечение в случае их наличия.

Для консультации по результатам ПЦР обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

ПЦР анализ — преимущества, расшифровка и описание метода

Впервые об анализе методом ПЦР заговорили в 1983 году. Данная методика была разработана Кэри Мюллисом и сотрудниками его лаборатории. С тех пор популярность исследования неуклонно возрастает, т.к. оно обладает существенным рядом преимуществ перед другими методиками.

На сегодняшний день ПЦР диагностика является эталоном или стандартом в выявлении инфекций и возбудителей заболеваний, особенно протекающих бессимптомно. В первую очередь это доклиническая диагностика.

ПЦР анализ, что это такое?

Проведение анализа в ПЦР машине

Сущность ПЦР анализа заключается в том, что в пробирке клонируются (многократно увеличиваются) последовательности нуклеиновых кислот (ДНК или РНК), характерных для определенного вида возбудителей.

Аббревиатура ПЦР расшифровывается как — полимеразно цепная реакция.

Главная отличительная черта данного метода – это амплификация, т.е. создание огромного числа копий необходимого гена или его фрагмента. Все это производится вне организма, т.е. в пробирке.

Так, если проведено 20 циклов ПЦР, то получается примерно 1 миллион копий и более. Это позволяет обнаружить инфекцию даже при её незначительном количестве в исходном материале, когда другие методы анализа бессильны. Это определяет высокую чувствительность данного метода.

Простыми словами можно провести такую аналогию — одну маленькую песчинку на полу вы не заметите, но после увеличения количества песчинок в миллион раз (проведение ПЦР), кучка песка уже будет хорошо видна.

Преимущества ПЦР-диагностики

Основными преимуществами анализа на инфекции ПЦР-методом являются:

  • наиболее высокая чувствительность и специфичность в сравнении с другими методами, используемыми для выявления инфекционных агентов;
  • возможность выявления микроорганизмов в разнообразных биологических материалах (кровь, моча, влагалищный секрет, слюна и т.д.);
  • возможность выявить одновременно несколько причинных микроорганизмов, если таковое наблюдается. Для сравнения — использование бактериологических методов не дает такой возможности, т.к. необходимо применение различных сред для выращивания различных болезнетворных микробов;
  • возможность транспортировки биологического материала, т.к. для выявления возбудителя не обязательно сохранять его в живом виде;
  • скоростьвыполнения анализа;
  • точность проводимой этиологической диагностики;
  • возможность количественного определения возбудителей — особенно актуально для условно-патогенных микробов, которые только по достижении определенной концентрации способны вызывать заболевание;
  • способность контролировать течение инфекционного процесса при проведении лечения.

Анализ ПЦР на инфекции

В настоящее время методом полимерзной цепной реакции определяют большинство половых (и других) инфекционных заболеваний. Диагностика получила широкое распространение за счет своей высокой чувствительности и специфичности.

Особенно большой популярностью пользуется анализ ПЦР на хламидии.

Это связано с тем, что данные микроорганизмы обитают внутриклеточно, что создает определенные трудности в их обнаружении.

ПЦР-диагностика позволяет выявлять даже минимальное количество хламидий, которые, как правило, еще не приводят к появлению клинических симптомов. Даже наличие только 2 молекул нуклеиновых кислот в исследуемом материале позволяет выявить причинную инфекцию.

А это залог успешного лечения, которое начинается еще на доклиническом этапе.

Также производится определение инфекций:

  • ВИЧ;
  • вирусные гепатиты;
  • туберкулез;
  • клещевой энцефалит;
  • различные венерические заболевания и т.д.

ПЦР-диагностика позволяет решать и ряд других важных задач:

  • мониторинг терапии и оценка ее эффективности;
  • определение «нагрузки вирусами», на основании которой производится индивидуальный подбор дозы препарата;
  • выявление штаммов микроорганизмов, отличающихся фармакологической устойчивостью (нечувствительностью к лекарственным препаратам).

Подготовка к сдаче анализа

Целенаправленно готовиться к сдаче анализа, который будет проводиться методом ПЦР, не требуется. Однако очень важно, чтобы специалист производил забор материала с соблюдением всех необходимых условий стерильности.

Так, например, для взятия крови следует применять специальные вакуумные системы, для взятия секрета половых органов следует использовать специальные пробирки и т.д.

В некоторых случаях в лабораторию материал следует транспортировать. Чтобы это сделать правильно, необходимо герметично закрыть емкость с биологическим материалом. Это позволит предупредить проникновение туда иных микроорганизмов, обитающих во внешней среде.

Расшифровка результата ПЦР

Результаты ПЦР-анализа могут быть двух вариантов:

  • положительный – возбудитель обнаружен;
  • отрицательный – возбудитель не выявлен.

Следует знать — даже при отсутствии клинической симптоматики может быть получен положительный результат.

В данном случае ориентироваться необходимо на данные полимеразной реакции, т.к. она позволяет выявить заболевание на доклинической стадии.

Иногда может быть получен сомнительный ответ, когда количество выявленных копий соответствует верхней границе нормы. Чтобы уточнить причину заболевания, следует повторить анализ, уделив особое внимание условиям сбора биологического материала.

Насколько точна ПЦР-диагностика?

Основные преимущества ПЦР-диагностики можно сформулировать в виде нескольких тезисов:

  • возможность получения огромного числа копий патогенных микроорганизмов;
  • большое количество копий – это залог успешного секвенирования (выявления).

Это обеспечивает высокую точность ПЦР-анализа для обнаружения внутриклеточных возбудителей и медленно растущих микроорганизмов.

Поэтому метод особенно информативен для выявления туберкулезных микобактерий и других подобных инфекционных агентов. Он обладает высочайшей точностью и не нуждается в перепроверке полученных результатов (кроме казуистических случаев).

Для получения наиболее достоверных результатов необходимо выполнение двух основных условий, которые предупреждают экзогенное (внешнее) инфицирование:

  • правильный забор материала;
  • правильная транспортировка.