Респираторный хламидиоз материал для исследования

Лабораторная диагностика хламидиозов

Для диагностики хламидиозов используются методы, направленные на выявление возбудителя или его антигенов или же антихламидийных антител.

Таблица. Методы лабораторной диагностики хламидиозов.

Методы

Цель

Используемые тесты

Морфологические

Выявление морфологических структур возбудителя

Окраска препаратов по Романовскому – Гимзе, раствором Люголя и др. Иммунофлюоресцентный анализ (ИФА прямой и непрямой).

Культуральные

Выделение возбудителя

Культура клеток

Нужные эмбрионы

Лабораторные животные

Иммунологические

Выявление • антигена и

• антитела

МФА прямой, ИФА и др.

РСК, МФА прямой, ИФА и др.

Молекулярно- биологические

ДНК диагностика

Гибридизация, амплификационные тест – системы (ПЦР, ЛЦР и др.)

Выбор того или другого метода, прежде всего, зависит от возможности лаборатории и характера процесса. Более достоверные ответы можно получить при одновременном использовании нескольких методов.

Забор материала

Материалом для исследования при урогенитальном хламидиозе являются мазки, соскобы со слизистой оболочки уретры, цервикального канала, шейки матки, прямой кишки, конъюктивы и т. п., которые забирают ложечкой Фолькмана, тампоном, платиновой петлёй или специальными щёточками. Для исследования можно также использовать сперму, сок простаты.

Забор материала проводится до лечения антибиотиками. Перед взятием материала из мочеполового тракта больные не должны мочиться 1 – 1,5 часа.

* Морфологические (цитологические) методы основаны на выявлении включений хламидий при использовании различных методов окраски. До недавнего времени наиболее распространёнными методами были окраска по Романовскому – Гимзе и раствором Люголя.

При окраске по Романовскому – Гимзе цитоплазматические включения видны как округлые или полулунной формы структуры красно – фиолетового цвета (ЭТ) или сине – фиолетового цвета РТ.

При окраске раствором Люголя включения красно – коричневого цвета в клетках, окрашенных в жёлтый цвет. В последнем случае препараты легче просматривать, но чувствительность этого метода невысокая – 25 – 30 %, а по некоторым данным – 5 – 15 %, как впрочем, и при окраске по Романовскому – Гимзе в случае урогенитального хламидиоза. При конъюктивите чувствительность несколько выше 30 – 60 %.

Несмотря на простоту метода, на просмотр препарата уходит 36 – 40 минут, и метод не применим для скрининга. Кроме того, возможно обнаружение псевдовключений.

Более высокой чувствительностью (90 – 95 %) и специфичностью до 98 % обладает иммунофлюоресцентный анализ, который приказом МЗ РФ регламентирован для постановки диагноза хламидиоза.

Используют как прямую РИФ, так и непрямую. При прямой РИФ используются моноклональные антитела, меченные флюоресцирующим изотиоционатом против главного белка внешней мембраны хламидий, имеющегося во всех 15 известных сероварах C. trachomatis. В люминисцентном микроскопе ЭТ и РТ видны как ярко – зелёные на красно – коричневом фоне окрашенных клеток. Оценка проводится по 50 клеткам.

* Культуральные методы

Для исследования можно использовать различные культуры: Hela L – 929, культуру 21 из клеток почек хомячков, но, по мнению большинства исследователей, лучшей является культура клеток Мак – Коя (Mc Coy).

Культуральные методы являются достаточно дорогостоящими, требуют от персонала специальных знаний, а также особого оборудования и занимают много времени. Достоинством является высокая чувствительность и 100 % специфичность.

* Иммунологические методы

Наряду с прямой реакцией иммунофлюоресценции для выявления антигена используется ИФА. Твердофазный ИФА на основе моноклональных антител основан на наличии у хламидий термостабильного родоспецифического (LPS) антигена. Чувствительность метода – 80 – 95 %, специфичность – 90 %.

Также используется иммуноэнзимный метод (ELJSA). При этом используется Ат, конъюгированные с ферментом (пероксидаза хрена, щелочная фосфотаза и др.).

* Молекулярно – биологические методы:

а) основаны на выявлении хламидийной ДНК (РНК) в образцах путём гибридизации нуклеиновых кислот с использованием ДНК – зонда, меченного биотином;

б) в последние годы широко используется ПЦР (PCR) и лигазная цепная реакция – ЛЦР (LCR).

Урогенитальный хламидиоз нередко протекает с осложнениями, при которых возбудитель недоступен. Поэтому используются серологические реакции для выявления Ат: РСК, РНГА, реакция радиоиммунопреципитации (РИА), иммунофлюоресценция (МФА – JFA), иммунопероксидазные методы (ИПА – JPA), иммуноферментный анализ (ИФА – EJA/ ЕLJSA), микроиммунофлюоресценция (МИФ).

Микоплазмы

Микоплазмы – группа антропонозных инфекционных болезней, вызываемых микоплазмами, характеризуются поражением органов дыхания и мочеполовых органов.

Таксономия:

Класс: Mollicutes («мягкокожие»)

Порядок: Mycoplasmatales

Семейство: Mycoplasmataсeae

Род: Mycoplasma (включает ≈ 100 видов)

Ureapеasma (насчитывает 3 вида)

Виды (патогенные для человека):

— M. pneumoniae

— M. hominis

— M. genitalium

— Ureaplasma urealyticum

Первые патогенные микоплазмы были выделены Нокаром, Ру, Бореллем (1893 – 1898 гг.) от животных. Полное морфологическое описание возбудителя проведено Борде (1910) и Бореллем (1910), М. Г. Тарковский и Е. П. Джунковский позднее разработали методы их культивирования.

Первые патогенные для человека микоплазмы были выделены из абсцесса бартолиновых желёз Диенесом и Эдзаллом (1937), а также Итоном от больного атипичной пневмонией (1944 – агент Итона). Только в 1962 г. микроб был отнесён к микоплазмам и окончательно установлена его роль как возбудителя пневмонии.

Морфология:

Это мелкие (0,1 – 1,2 мкм), проходящие плеоморфные, через бактериальные фильтры микроорганизмы, которые могут образовывать коковидные, ветвящиеся, многоядерные формы, лишённые истинной клеточной стенки и не способные синтезировать её компоненты. Функции клеточной стенки выполняет трёхслойная цитоплазматическая мембрана. Грамотрицательные, как правило, неподвижные микроорганизмы. Содержат в своём составе ДНК и РНК. Геном микоплазм отличают меньшие размеры. Обычно размножаются бинарным делением, также способны к почкованию и фрагментации.

Культуральные свойства. Это факультативные анаэробы. Микроорганизмы могут культивироваться на а) искусственных питательных средах, но прихотливы к условиям культивирования; в питательные среды (на переваре Хоттингера) добавляют нативную сыворотку, холестерин, нуклеиновые кислоты, углеводы, витамины и различные соли. Чувствительны к микроэлементному составу среды – высокое содержание Zn2+, Mg2+, Co2+, Fe2+ может ингибировать рост. Микроорганизмы растут при температуре 22 – 41 ° С (оптимальная 36 – 37 ° С), оптимум pH 6,8 – 7,4; растут медленно 5 – 7 суток. На твёрдых средах образуют характерные мелкие колонии (0,2 – 1,5 мм) с более тёмным и зернистым центром типа «яичницы глазуньи». На средах, содержащих кровь, дают α – и β – гемолиз.

На полужидких средах растут по уколу.

На жидких средах дают незначительное помутнение, некоторые штаммы дают плёнку и придонный рост.

б) для культивирования можно использовать куриные эмбрионы, гибель которых наблюдается с 3 – 5 пассажа.

в) также используют культуру клеток.

Биохимические свойства микоплазм разнообразны. Выделяют 2 группы:

  1. «истинные» микоплазмы разлагают с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, маннозу, фруктозу, крахмал, гликоген;

  2. восстанавливающие соединения тетразолия, окисляющие глумат и лактат, но не ферментирующие углеводы.

Все виды не гидролизуют мочевину и эскулин.

Антигенная структура:

Сложная, имеются видовые антигены, представленные липидами, полисахаридами, белками. Для микоплазм характерен выраженный антигенный полиморфизм.

Факторы патогенности:

— экзотоксины (например, нейротоксин у M. pneumoniae)

— эндотоксины

— гемолизины

— ферменты патогенности: фосфолипаза, аминопептидаза, нейраминидаза, протеазы

— адгезины в составе поверхностных антигенов.

Устойчивость: мало устойчивы во внешней среде, чувствительны к высокой температуре (45 ° — 15 минут), к высушиванию, УФО, дез. растворам. Из антибиотиков чувствительны к макролидам, тетрациклинам, левомицетинам, аминогликозидам.

Устойчивы к низкой температуре, из антибиотиков – к пеннициллинам. Широко распространены в природе, в почве, в воде, организме человека и животных.

Роль в патологии

M. Pneumoniae – один из основных возбудителей лёгочных поражений, вызывает до 20 % всех пневмоний; в РФ в различные годы респираторный микоплазмоз занимал 4 – 6 место среди прочих возбудителей ОРЗ.

Источник инфекции – больной или носитель.

Основной путь передачи – воздушно – капельный.

Восприимчивость зависит от иммуногенетических особенностей организма. Чаще всего вспышки инфекции возникают при формировании новых коллективов (например, в воинских частях). Заболевание выше в холодный период времени.

Патогенез. Возбудитель фиксируется на мембране клеток мерцательного эпителия бронхов, нарушает их структуру (липидные компоненты мембраны микоплазм диффундируют в клеточную мембрану, а стеролы клетки поступают в мембрану микоплазм). После проникновения в клетку микоплазмы размножаются в их цитоплазме, образуя микроколонии. Цитотоксическое действие микоплазм обусловлено продукцией перекисей, разрушающих липидные мембранные комплексы, что приводит к гибели клеток.

В патологический процесс вовлекаются межальвеолярные перегородки. Возможна гематогенная диссеминация возбудителя с поражением печени, почек, центральной нервной системы. В патогенезе бронхита и пневмонии существенное значение имеют вторичная бактериальная флора, а в других органных поражениях – аутоиммунные реакции.

Иммунитет: Формируется клеточный и гуморальный иммунный ответ.

Продолжительность постинфекционного иммунитета зависит от интенсивности заболевания от 1 года до 10 лет.

Инкубационный период от 4 до 25 суток, чаще 7 – 14 дней.

Клинически различают 2 формы болезни:

— острое респираторное заболевание (ОРЗ)

— пневмония

Специальная профилактика — не разработана. Необходима изоляция больных из коллектива.

Для лечения используются антибиотики тетрациклинового ряда и макролиды (эритромицин, азитромицин).

M. hominis входит в группу урогенитальных микоплазм, также включающую M. genitalium, M. fermentans.

Основной путь передачи – половой. Возможно заражение новорождённых, которые инфицируютя при прохождении родовых путей.

M. hominis преимущественно инфицирует органы мочеполовой системы, вызывая деструктивно – воспалительные процессы с выраженными микроциркуляторными нарушениями. У мужчин вызывает уретриты и простатиты, у женщин – уретриты, цервициты, воспалительные поражения тазовых органов. Особую опасность представляет урогенитальный микоплазмоз беременных, так как он может стать причиной невынашивания беременности, преждевременных родов, внутриутробного заражения плода и привести к развитию послеродового сепсиса.

M. fermentans. Несмотря на то, что вид был выделен ещёв 1950 г., многие из его свойств остаются неизученными.

1. Наиболее часто возбудитель выделяется от ВИЧ — инфицированных пациентов (70 %).

2. Играет роль в развитии урогенитальных заболеваний.

3. Доказана его роль в развитии хронического пиелонефрита.

4. Возбудитель выделяют у 45 % больных ревматоидным артритом. Патогенез суставных поражений во многом связан со способностью микоплазм запускать аутоиммунные процессы, а также длительно персестировать в организме и аккомулироваться в суставных хрящах и костном мозге.

Ureaplasma urealiticum

(urea – мочевина, plasma – принимающий любую форму).

Впервые выделена в 1954 г. от больного уретритом (Шепард).

Морфология: В настоящее время выделяют 3 основных типа микроорганизмов:

— малые (мелкие) (120 – 150 нм) с гомогенной цитоплазмой и

множеством рибосом;

— средние (500 – 750 нм) с рибосомами по периферии;

— крупные, с негомогенной цитоплазмой и выраженным

нуклеоидом.

Культуральные свойства

сходны с микоплазмами. Отличается быстрым ростом при культивировании в атмосфере газовых смесей, содержащих 5 % СО22 и 95 % № 2 2, либо 5 % О22, 10 % СО2 и 85 % № 2. На жидких средах растёт скудно. Микроаэрофилы.

Биохимический свойства

Уреаплазмы инертны к сахарам, каталаза – отрицательны, гидролизуют мочевину до аммиака, то есть характерна уреазная активность.

Отличительная особенность метаболизма – способность продуцировать насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты.

Антигенная структура сложная. В настоящее время выделяют 16 сероваров, разделённых на 2 группы (А и В). Основные антигенные детерминанты – поверхностные полипептиды.

Факторы патогенности. Обладает протеазной активностью, направленной

на Jg А человека. Продуцирует фосфолипазу, связанную с простагландинами эукариотических клеток. Видимо, данный фактор имеет отношение к преждевременным родам.

Эпидемиология:

Источник – больные лица.

Путь передачи – половой.

Вызывает заболевания: негонококковые уретриты (50 % у мужчин), уреаплазменные простатиты, доказана роль в развитии мочекаменной болезни, у женщин – воспалительные заболевания органов малого таза, бесплодие.

Патогенез:

Механизм патогенеза урогенитальных микоплазмозов до конца не выяснен. Имеются лишь отдельные сведения о взаимодействии микоплазм с клетками.

  1. Персистенция уреаплазм на мембране, однако пока не установлено, являются ли они мембранными паразитами или проникают в цитоплазму.

  2. Продукты жизнедеятельности уриоплазм токсичны для клеток организма и оказывают повреждающее действие на клеточную стенку. Окисление жиров в результате активности пероксидазы также способно привести к повреждению клеточной стенки.

  3. Токсичной для организма может быть концентрация аммиака, образующаяся в результате расщепления мочевины.

  4. Уреаплазмы утилизируют компоненты клетки хозяина, такие как холестерин и жирные кислоты.

Лабораторная диагностика.

Особенности метаболизма уреаплазм позволяют легко дифференцировать их от прочих микоплазм по способности секретировать уреазу (метод определения уреазной активности).

Лабораторная диагностика микоплазм и уреаплазм

Используют методы:

  1. бактериологический (культуральный)

В настоящее время используются специальные тест – системы «Mycoplasma ДИО» (фран.), «Mycoplasma JST»;

2) серологические методы:

а) РСК, РПГА, РИМ, ИФА – для выявления антител;

б) определение антигена – РАГА (реакция агрегатгемагглютинации), ИФА, РИФ;

3) метод активированных частиц;

4) метод генных зондов;

5) ПЦР;

Рубрики

Хламидии — это мелкие коккообразные бактерии, характеризующиеся особой цикличностью развития, внутриклеточным типом паразитирования с образованием микроколоний, окруженных мантией (откуда и пошло название — греч. chlamus-плащ). Вызывают хроническое инфекционное заболевание глаз трахому, острую бактериальную инфекцию пситтакоз (орнитоз), венерический лимфогранулематоз, хламидийную пневмонию, урогенитальный хламидиоз.

Материал для исследования, методы лабораторной диагностики хламидиозов, цель исследования и результат.

1.Трахома.

Материал для исследования — соскоб эпителия коньюнктивы.

  • При микроскопическом методе в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе в пораженных клетках обнаруживаются кокковидные включения (тельца Провацека-Хальберштедтера).
  • Микробиологический метод. Культивирование на куриных эмбрионах и культурах клеток L-929, НеLа.
  • Серологический метод . Выявление антител в сыворотке крови пациента с помощью хламидийного диагностикума в реакциях ИФА, РНГА.

2. Орнитоз.

Материал — кровь берётся в количестве 8-10 мл в первые 2 недели заболевания, мокрота до 25 дня.

  • Микробиологический метод. Культивирование на куриных эмбрионах и культурах клеток L-929, НеLа, НEр-2 — выявление специфических включений в мазках-отпечатках, окрашенных по Романовскому-Гимзе или выявление при помощи прямой иммунофлуоресценции
  • Биологический метод. Заражение детёнышей белых мышей – в мазках-отпечатках обнаруживаются микроколонии хламидий
  • Серологический метод. Нарастание титра антител в 4 раза в парных сыворотках при применении РСК, ИФА
  • Аллергическая проба с орнитином. Применяют для ранней диагностики (2-9 день) и ретроспективной диагностики.

3. Респираторный хламидиоз.

Материал — слизь из носоглотки.

  • Реакция имунофлуоресценции с применением антител.

Хламидиоз привыкли считать венерическим заболеванием, но есть еще и легочная форма, которую медики называют респираторной. Она отличается путем заражения. Инфекция передается воздушно-капельным путем от зараженного человека, через различные предметы, перья и фекалии птиц.

Достаточно провести время рядом с чихающим или кашляющим больным, подержать в руках посуду, игрушки, другие вещи зараженного, поднять с пола перышки или случайно испачкаться птичьми испражнениями. При этом признаки болезни могут обнаружиться только спустя пару недель. Все зависит от состояния организма, способа передачи и формы.

Симптомы респираторного хламидиоза у взрослых

При легочной форме часто проявляется в виде:

  • ОРВИ или ОРЗ. Появляются насморк, продолжительный кашель, болят суставы.
  • Астмы либо бронхита. Возникает одышка, кашель и приступы удушья.
  • Воспаления гортани, трахеи, отека слизистой. Становится трудно дышать, кашель напоминает лай собаки, увеличиваются лимфатические узлы и температура тела.
  • Пневмонии. Начинает болеть в груди, хрипеть внутри, мучает сильный кашель, выделяется мокрота с гноем.

Есть и 5 внелегочных форм с характерными для них признаками: конъюнктивит, уретрит, реактивный артрит, пиелонефрит, лимфаденит.

При конъюнктивите обычно плохо переносится яркий свет, глаза краснеют, из них выделяется гной, отекают веки. Воспаление мочеиспускательного канала, или уретрит, проявляется в болезненных и жгущих ощущениях, гнойных выделениях, зуде и покраснении кожи возле половых органов.

Реактивный артрит обнаруживается примерно через месяц. Зараженные бактерией замечают, что сустав на руке или ноге стал больше, опух, появилась краснота. Вдобавок стали быстро уставать, часто сталкиваться с болью в спине, даже если не проводили время активно. А если воспользоваться градусником, можно увидеть значения выше нормы.

Подробнее о хламидии и ее особьенностях вы можете узнать в нашей статье.

Инфекционно-воспалительный процесс в почках (пиелонефрит) дает знать о себе болью, зудом, повышением кровяного давления. Чаще хочется в туалет. А при воспалении лимфатических узлов (лимфадените) прощупываются шарики, иногда их даже можно увидеть из-за серьезного увеличения в размерах.

Как диагностируется болезнь

Поскольку форм у респираторного хламидиоза много, и признаки часто относятся к другим заболеваниям, нужна тщательная диагностика. Одного метода для выявления бактерии мало. Так, при легочном хламидиозе врачи:

  • простукивают область сердца подушечками пальцев, прослушивают ее специальным инструментом;
  • измеряют частоту дыхания, пульс, температуру тела, давление;
  • проводят бронхоскопию;
  • изучают результаты общих анализов крови и мочи;
  • выполняют микроскопическое исследование мокроты;
  • назначают рентгенографию легких.

Это только самые простые способы, нередко они дополняются более серьезными. При осложнениях нужны еще и ЭКГ, томография, биохимические анализы, УЗИ.

Как известно, всякая болезнь имеет свои, присущие только ей, признаки. Но это не имеет никакого отношения к хламидиозу.
Хламидиоз – это болезнь, которая не имеет чётких симптомов, присущих только ей, а иногда и вовсе протекает бессимптомно. И даже если какие-то симптомы проявляются, то чаще всего они схожи с признаками других ЗППП.
Поэтому для постановки диагноза решающими являются лабораторные методы исследования. В отличие от многих других заболеваний диагноз хламидиоз – чисто лабораторный.

Кто, прежде всего, должен обследоваться на хламидиоз?

  • Мужчины и женщины, имеющие много половых партнеров, особенно случайных.
  • Лица, у половых партнёров которых обнаружен хламидиоз, даже при отсутствии жалоб и симптомов. Ведь осложнения хламидиоза могут развиваться даже при его бессимптомном течении. Риск заражения партнера составляет около 90%.
  • Женщины, страдающие бесплодием более 2 лет, даже в том случае, если половой партнёр обследован и здоров.
  • Женщины с эрозиями шейки матки, цервицитами, воспалением яичников (особенно при планировании беременности). Причем влагалищный мазок при этом может быть нормальный.
  • Женщины с нарушением протекания беременности: самопроизвольные выкидыши, преждевременные роды, многоводие, повышение температуры неясного происхождения во время настоящей беременности.

Что исследуют?
Для обнаружения хламидий необходимо произвести забор материала. Это может быть соскоб, содержащий клетки больного органа — влагалища, шейки матки, секрет простаты, соскоб из уретры, конъюнктивы глаза. Таким материалом также может быть кровь, моча и сперма у мужчин.

Какие анализы назначают при хламидиозе и насколько они могут быть полезны?
Сначала мы остановимся на возможных методах обследования, а затем сделаем вывод, какие из них наиболее предпочтительны.

1. Цитологический (микроскопический) анализ.
Учитывая то, что хламидия – внутриклеточный паразит , в обычном мазке выделений её обнаружить не удаётся. Поэтому для микроскопии берут не мазок, а соскоб, который содержит клетки больного органа (влагалища, шейки матки, секрет простаты, соскоб из уретры, конъюнктивы глаза) и окрашивают его специальным красителем. Накапливая определённые красители, хламидия становится видна под микроскопом.
Цитологический метод эффективен только при острых формах заболевания. Он проводится только при отсутствии возможности использовать другие методы.
При урогенитальном хламидиозе точность этого анализа равна примерно 10-12%

2. Иммуноцитологический анализ — Реакция прямой иммунофлюоресценции (РИФ или ПИФ).
Этот метод предусматривает прямое выявление антигенов хламидий. Для этого материал, полученный при соскобе, обрабатывают специальными антителами, которые непосредственно обработаны флуоресцирующим веществом. Эти антитела связываются со специфическими антигенами хламидий. Затем при люминесцентной микроскопии хламидийные включения в клетках определяют по зелёному или желто-зеленому свечению.
Иммуноцитологический метод используется как при острой, так и при хронической фазе заболевания.
Существенным недостатком РИФ является большое количество ложноотрицательных и ложноположительных результатов. Ложноотрицательные результаты чаще всего связаны с нарушением правил забора биологического материала. Ложноположительные результаты могут быть следствием сочетанных инфекций урогенитального тракта, когда вместе с хламидией присутствует другая микробная флора. Кроме всего прочего, РИФ носит очень субъективный характер, т.к. зависит от опыта и личной оценки лаборанта. Поэтому РИФ дает очень высокий процент ложноположительных результатов и не может считаться достоверным. Недостатком РИФ также является то, что с её помощью нельзя оценить результаты лечения.
При урогенитальном хламидиозе точность метода составляет около 50%.

3. Иммуноферментный анализ (ИФА).
ИФА является методом непрямого выявления бактерий, т.е. возбудитель не обнаруживается непосредственно, а определяются специфические антитела (IgG, IgA, IgM) к нему. В основе метода лежит способность иммунной системы вырабатывать антитела ( иммуноглобулины , Ig ) в ответ на внедрение чужеродных агентов.
Преимущества ИФА заключаются в том, что он позволяет не только выявить возбудителя заболевания, но также определить на какой стадии оно находится (острой или хронической) и оценить эффективность проведенного лечения. Преимуществом также является автоматизация метода и быстрота его проведения.

Как оценивают результаты?
При инфицировании хламидиями специфические антитела появляются на 5-20-й день заболевания. При этом появление каждого класса антител происходит на определённой стадии заболевания.

  • При первичном инфицировании сначала появляются IgМ, затем – IgA, и в последнюю очередь – IgG.
  • Самыми первыми после первичного инфицирования (через 5 дней) появляются IgM, которые защищают организм от возможного распространения инфекции. Они являются маркерами острой стадии заболевания. К 10-му дню количество IgM в крови достигает пика. Затем их уровень начинает снижаться, и появляются IgA. В течение небольшого периода времени могут обнаруживаться параллельно IgM и IgA антитела . Этот период свидетельствует о разгаре инфекционного процесса.
  • IgA можно обнаружить через 10 дней от момента появления первичных симптомов заболевания. Они защищают слизистые оболочки от проникновения бактерий глубоко в ткани. Высокий уровень IgA в выделениях слизистых оболочек говорит о хорошо функционирующем местном иммунитете.
  • Затем, через 15 — 20 дней после внедрения в организм Chlamydia trachomatis в крови появляются IgG, а уровень IgA снижается.
  • Острый первичный процесс характеризуется высоким уровнем (титром) IgM в сочетании с низким титром IgG.
  • При повторном заражении отмечается быстрое нарастание титра IgG и IgА и практически полное отсутствие IgM.
  • При хроническом течении выявляются специфические IgG и А, концентрации которых не изменяются на протяжении длительного времени.
  • При излечении через 1,5-2 месяца IgA и IgM в крови не обнаруживаются, а IgG могут сохраняться в течение нескольких лет, однако их уровень снижается в 4-6 раз.
  • Длительно обнаруживаемые IgG указывают на перенесённую хламидийную инфекцию.
  • При обострении хламидиоза количество IgA и IgG увеличивается в несколько раз.
  • Эффективность проведенного лечения определяется по наличию IgA. Если через 2 месяца после курса лечения в крови обнаруживаются IgA — это означает, что инфекция осталась.

Необходимо отметить, что специфические антитела , вырабатываемые к хламидиям, не обеспечивают стойкого иммунитета против них.
Точность этого анализа на хламидиоз составляет около 70 %. Это связано с тем, что антитела к хламидиям могут присутствовать и у здоровых людей вследствие ранее перенесенного заболевания, а также определяться при респираторных и других видах хламидийных инфекций.

4. Полимеразная цепная реакция (ПЦР).
С помощью ПЦР выявляется специфический участок или фрагмент ДНК хламидий в исследуемом материале, поэтому в сравнении с другими методами спутать хламидии с какой-то другой инфекцией невозможно. Он эффективен как в острой, так и в хронической фазе заболевания. При этом для анализа нужно совсем немного материала, результаты же готовы уже через 1-2 дня.
Для ПЦР исследования материалом может быть соскоб из уретры или цервикального канала, секрет предстательной железы, осадок мочи, соскоб с конъюнктивы глаз, кровь.
При диагностике первичного заражения более информативным является выявление данной инфекции в местах изначальной локализации, т.е. материалом должны быть соскобы из половых путей. Ложноположительные результаты ПЦР могут быть в случае нарушения процесса забора, транспортировки материала и проведения самого анализа.

Важно! Для оценки эффективности лечения ПЦР исследование нельзя проводить ранее чем через месяц после курса антибиотикотерапии, т.к. можно получить ложноположительные результаты. Это связано с тем, что при выявлении фрагмента ДНК хламидии невозможно оценить, насколько жизнеспособна сама микробная клетка. В этом случае жизнеспособность хламидий, а также связанная с ней возможность рецидивов болезни оценивается с помощью микробиологического метода. Если хламидия нежизнеспособна, то, несмотря на наличие фрагмента ДНК, микробные клетки не будут расти в клеточной культуре.
На сегодняшний день точность этого методы является самой высокой — до 100 %.
Данный метод рекомендован как предпочтительный в диагностике хламидийной инфекции.

5. Микробиологическое исследование (культуральный метод) с определением чувствительности к антибиотикам.
Суть этого метода состоит в том, что исследуемый материал высевается на специальную среду и выращивается. Затем по характеру роста и другим признакам идентифицируется возбудитель. Культуральный метод является наиболее чувствительным, он позволяет не только выявить жизнеспособные хламидии, но и подобрать антибиотик, к которому чувствителен данный микроорганизм.
Материалом для исследований может служить соскоб из уретры, шейки матки, секрет простаты, соскоб с конъюнктивы глаза.
За месяц до исследования нельзя применять антибиотики.
Микробиологическое исследование предпочтительнее проводить в следующих случаях:

  • Для оценки эффективности проведенного антибактериального лечения.
  • Для выявления чувствительности к антибактериальным препаратам.
  • Для выявления хламидий у лиц с иммунодефицитами (ВИЧ инфицированные, онкологические больные после лучевой и химиотерапии, лица, получающие иммунодепрессанты, др.).

Недостатками культурального метода диагностики хламидиоза являются трудоемкость, дороговизна и длительность исследования. Также необходимо особое оснащение лаборатории и очень высокая квалификация персонала. Кроме того, данный метод, как никакой другой, требует безукоризненного соблюдения правил при заборе материала, транспортировке и хранении.
Реальный срок получения результатов этим методом – не менее семи дней.
Выявляемость хламидий при посеве составляет до 90 %.

6. Экспресс-диагностика.
В основе всех методов экспресс-диагностики хламидиоза лежит ферментспецифическая реакция и иммунохроматография. Для этого используются специальные наборы для экспресс-диагностики, которые позволяют визуально оценивать результаты уже через 10-15 минут. Это очень быстрый и удобный метод, но его точность составляет всего 20-25 %.

  • Не существует ни одного метода, который бы в 100% случаев выявлял хламидии. Поэтому в большей части случаев лабораторная диагностика должна включать в себя сочетание не менее двух методов.
  • Самые чувствительные анализы на хламидиоз — ПЦР (ДНК — диагностика) и микробиологический анализ. Они являются «юридическим стандартом» при диагностике хламидиоза.
  • В случае первичного заражения до применения антибиотиков чаще всего достаточно одного ПЦР исследования.
  • При хронических процессах — ПЦР или микробиологический тест, или РИФ+ИФА.
  • При вероятности перехода возбудителя в L-форму – ИФА.
  • Для оценки эффективности лечения в идеале используется микробиологическое исследование. При невозможности его проведения – ПЦР + ИФА.
  • Для определения стадии болезни – ИФА.
  • У больных с иммунодефицитами ИФА не информативен, в идеале использовать микробиологический метод.
  • Не стоит особо полагаться на результаты по определению чувствительности хламидий к антибиотикам. Ведь, как известно, микроорганизмы ведут себя по-разному в пробирке (in vitro) и в живом организме(in vivo).

Урогенитальный хламидиоз

врач, к. м. н., Юдинцева М. С., m.yudintseva@vidal.ru

Урогенитальный хламидиоз вызывается Chlamidia trachomatis и является в настоящее время самым частым заболеванием, передающимся половым путем. Хламидийная инфекция встречается в несколько раз чаще чем гонорея, значительное труднее поддается лечению, бывает ассоциирована с другими заболеваниями, передающимися половым путем (гонококки, трихомонады, вирус простого герпеса и др.).

Возбудитель хламидиоза — Chlamidia trachomatis — уникальный микроорганизм. Хламидия обитает внутри живой клетки, подобно вирусу, но по своему строению скорее похожа на бактерию. Эта ее двойная природа, а также способность паразитировать внутри клеток и является причиной того, что выявить и лечить хламидиоз крайне трудно. Внутриклеточный цикл развития хламидии продолжается 24-72 часа, после чего инфицированная клетка разрушается и в межклеточное пространство попадает «отряд» молодых микроорганизмов, которые инфицируют все новые и новые клетки.
Причины заболевания

Заражение хламидиозом обычно происходит половым путём, однако передача происходит не во всех случаях: если гонореей от больного партнёра заразятся во время полового контакта 3 из 4 человек, то хламидиозом — 1 из 4. Имеют значение половые контакты любого рода: вагинальный, оральный или анальный. Женщины более восприимчивы к хламидиозу.

Также возможен контактно-бытовой путь передачи.

Дети могут заразиться хламидиозом при прохождении через инфицированные родовые пути, а также внутриутробно.

Инкубационный период (время от заражения до появления первых симптомов) составляет 2-3 недели.
Симптомы

Пациенты могут жаловаться на выделения из уретры (мужчины), влагалища (женщины) белого, желтого цвета или прозрачные. От нормальных выделений они могут отличаться неприятным запахом или желтоватым оттенком. Иногда возникает болезненность, жжение при мочеиспускании или половом акте, покраснения и зуд у наружного отверстия мочеиспускательного канала.

При развитии осложнений больные жалуются на боли в области промежности, мошонки, прямой кишки, женщин беспокоят боли внизу живота, в области поясницы.

Хламидиоз отличается от многих других инфекций, передающихся половым путем тем, что он поражает не только половые органы, но и нижние отделы мочевыделительной системы. Клиническая картина часто стертая, заболевание может длительно протекать бессимптомно и диагностироваться только при развитии осложнений.
Диагностика

Если вы подозреваете у себя хламидиоз или любую другую инфекцию, передающуюся половым путем, следует как можно оперативнее обратиться к врачу (хламидиоз у мужчин лечат урологи, у женщин – гинекологи).

Диагностика хламидиоза сложна, поскольку Chlamydia trachomatis — внутриклеточный паразит. Для проведения анализов в зависимости от метода исследования может стать соскоб со слизистых, кровь, моча и сперма у мужчин. В настоящее время имеется возможность выявить самого возбудителя или антитела к нему в крови. Врач посоветует вам наиболее подходящий метод исследования.
Лечение
Что можете сделать Вы

Если у вас выявлена хламидийная инфекция, следует настоятельно рекомендовать вашему половому партнеру пройти обследование. Объясните ей/ему, что инфекция может протекать бессимптомно и не давать никаких клинических проявлений. К сожалению, сохранение постоянного контакта с инфекцией может приводить к повторному инфицированию и неэффективности лечения. В период лечения от половых контактов следует воздержаться или использовать презерватив.
Чем поможет врач

В лечении хламидийной инфекции в настоящее время применяют антибактериальные препараты из группы макролидов, тетрациклинов и фторхинолонов. Выбор антибиотика зависит от степени тяжести инфекции. Не занимайтесь самолечением. Только врач может грамотно подобрать препарат.

После окончания полного курса лечения вам могут порекомендовать пройти повторное обследования для подтверждения излечения. Как правило, для этого исследуют кровь методом ИФА или ПЦР.
Осложнения

У мужчин наиболее частым осложнением является воспаление придатка яичка – эпидидимит. У женщин – воспалительные заболевания матки и придатков.

Следует понимать, что наличие хронического воспалительного процесса в органах, отвечающих за детородную функцию, может вызвать развитие бесплодия у мужчин и женщин, привести к развитию различной патологии беременности (замершая беременность, выкидыши, преждевременные роды, патология развития плода). Именно поэтому так важно, вовремя пройти курс лечения.
Профилактика

Основой профилактики хламидиоза является отказ от беспорядочных половых связей. Использование презервативов далеко не во всех случаях позволяет предупредить заражение.

Очень важно сообщить своим половым партнерам о заболевании, даже если их ничего не беспокоит, и убедить их пройти обследование и лечение хламидиоза. Помните, что бессимптомное течение не снижает риска осложнений.

Возбудитель респираторного хламидиоза — Chlamydia pneumoniae

С. pneumoniae является возбудителем респира-

торного хламидиоза, вызывая преимущественно острые и хронические бронхиты и пневмонии.

В последнее время накапливаются данные о возможном участии этого вида хламидии в раз­витии атеросклероза и бронхиальной астмы.

Впервые атипичный штамм хламидии был изолирован от ребенка с трахомой на Тайване в 1965 г. Значительно позднее, в 1983 г., та­кой же штамм выделили в США от больного фарингитом. И только в 1989 г. Дж. Грейстон предложил называть хламидии, выделяемые от больных с заболеваниями респираторного тракта, Chlamydia pneumoniae.

С. pneumoniae обладает некоторыми отли­чиями от других хламидий: низкой степенью гомологии ДНК (имеют слабое генетичес­кое родство с другими хламидиями); формой элементарных телец (элементарные тельца С. pneumoniae грушевидной или копьевидной формы за счет расширения периплазматичес-кого пространства), а также видовым анти­геном. С. pneumoniae плохо культивируются. При заражении культур клеток мокротой боль­ных, откуда пытаются выделить возбудителя, клетки нередко погибают. С. pneumoniae может размножаться только в клетках линий HeLa и Нер-2.

Вид С. pneumoniae имеет три биовара: TWAR (TW-Taiwan, AR-Acute Respiratory). вызывающий заболевания у человека, а также Koala, патогенный для коал, и Equine — конский. Биовар TWAR раз­делен на 4 серовара: TWAR AR, RF, CWL. Серовар TWAR выделяется от человека чаше других.

Эпидемиология.Респираторный хламиди-оз— антропонозная инфекция: источником ее являются больные люди. Заражение происходит воздушно-капельным путем. Восприимчивость к инфекции высокая, особенно у молодых людей старше 20 лет. Распространение инфекции идет медленно, по-видимому, потому, что больные люди выделяют слишком мало хламидий, чтобы заразить окружающих. Однако у бессимптомных носителей хламидий способны накапливаться в верхних отделах респираторного тракта.

Заболевание широко распространено, осо­бенно в Северной Европе, где до 10 % пнев­моний вызываются С. pneumoniae.

Патогенез и клиника.Хламидий попадают в легкие человека через верхние дыхатель­ные пути. Обладая выраженным тропизмом к эпителию дыхательных путей, эти бактерии вызывают воспаление верхних отделов респи­раторного тракта и легких (фарингит, брон­хит, синусит, пневмония).

Благодаря тому, что их элементарные тель­ца имеют копьевидную форму, они заострен­ным концом прикрепляются к эпителиальным клеткам респираторного тракта. Внедряясь в легочную ткань и размножаясь, хламидий вы­зывают гибель клеток и тяжелое воспаление легких. Токсины хламидий и продукты распада клеток организма вызывают патологические изменения в различных органах и системах.

Хламидий вызывают так называемые «ати­пичные пневмонии», которые клинически неотличимы от других подобных инфекций легких, вызванных микоплазмами, легио-неллами или «респираторными» вирусами. Начало заболевания вялое, с незначительным подъемом температуры тела. Нередко одной из первых жалоб является синусит. Однако возможны и бессимптомные и субклиничес­кие формы респираторного хламидиоза.

С. pneumoniae удалось обнаружить в ате-роматозных бляшках коронарных артерий и аорты, поэтому ученые обсуждают возмож­ность участия С. pneumoniae в развитии ате­росклероза. Возможно, этот вид хламидий также играет роль в возникновении саркоидо-за, бронхиальной астмы, менингоэнцефали-та, артритов и других заболеваний.

Иммунитет.Перенесенное заболевание не оставляет прочного иммунитета.

Микробиологическая диагностика.Заключает­ся в постановке РСК для обнаружения специ­фических антител (серологический метод). При первичном заражении учитывают обнаружение IgM, при реинфекции надежным признаком ос­тается выявление нарастания титра иммуногло­булинов класса G. Применяют также РИФ для обнаружения хламидийного антигена и ПЦР

Учитывая трудности выделения возбуди­теля, культуральный (биологический) метод диагностики применяют крайне редко.

Лечение.Проводят с помощью антибиоти­ков (обычно тетрациклины и макролиды).

Профилактика.Только Не специфическая, как при других антропонозных хламидиозах. Специфическая профилактика пока не раз­работана.

16.11.3. Возбудители орнитоза (C.psittaci) Возбудитель орнитоза — Chlamydia psittaci

С. psittaci является возбудителем орнитоза (пситтакоза) — острого (реже хроническо­го) инфекционного заболевания, которое характеризуется преимущественным пора­жением легких, иногда — нервной системы п паренхиматозных органов (печени, селе­зенки) и явлениями интоксикации.

Заболевание было описано в 1876 г. Ф. Юргенсеном и получило название «псит­такоз», так как источником вспышки тяжелой пневмонии были попугаи (греч. psittakos — попугай). В 1930 г. возбудитель был выделен С. Бедсоном от больных людей. Позднее бо­лезнь получила название «орнитоз», так как резервуаром возбудителя могут быть многие виды птиц (греч. ornis — птица).

Эпидемиология.Орнитоз — зооантропоноз-ное заболевание. Источником инфекции яв­ляются более 170 видов диких и домашних птиц — голуби, попугаи, канарейки, утки, воробьи и др. Наиболее вирулентные штаммы хламидий выделены от попугаев и из орга­низма погибших от орнитоза людей. С. psittaci поражает также животных, особенно часто — крупный и мелкий рогатый скот. Поэтому животные также могут быть источником за­болевания человека. Дополнительным источ­ником инфекции для человека могут быть эктопаразиты птиц, а также крысы. От чело­века человеку заболевание передается крайне редко.

Таким образом, большое количество резер­вуаров возбудителя орнитоза объясняет широ­кую распространенность этого заболевания.

Механизм заражения— аэрогенный, пути передачи инфекции человеку — воздушно-ка­пельный и воздушно-пылевой. Редко возмо­жен фекально-оральный механизм заражения (путь — алиментарный): при употреблении в пищу мяса птицы, недостаточно хорошо обработанного термически. Иногда микро­бы заносятся грязными руками на слизистую оболочку глаз, носа, т. е. имеет место контак­тный путь передачи инфекции.

Восприимчивость людей к орнитозу высо­кая. Однако чаще наблюдаются спорадичес­кие случаи. Заболевание носит профессио­нальный характер: вспышки орнитоза отме­чаются на птицефабриках, животноводческих фермах, мясокомбинатах.

Патогенез.Возбудители обычно попада­ют в организм через слизистые оболочки верхних дыхательных путей. Обладая эпите-лиотропностью, они проникают в эпителий бронхов, бронхиол и альвеол, где размножа­ются, разрушая клетки. Развивается воспале­ние. Токсины микробов и продукты распада

клеток вызывают интоксикацию. Хламидий попадают в кровь (бактериемия), разносят­ся по организму, поражая паренхиматозные органы (печень, селезенку), центральную нервную и сердечно-сосудистую системы, суставы. При орнитозе имеет место аллерги-зация организма.

Клиника.Инкубационный период состав­ляет от 6 до 10 дней. Заболевание всегда на­чинается остро — повышение температуры тела до 38—40 «С, признаки интоксикации. Орнитоз чаще протекает как тяжелая пнев­мония с геморрагическими проявлениями, напоминая вирусную или микоплазменную. В патологический процесс вовлекаются пе­чень, почки, надпочечники, суставы. При осложненном течении орнитоза возможно развитие менингита и менингоэнцефалита, миокардита, эндокардита и перикардита.

Описана также новая форма хламидийной ин­фекции (при заражении от животных) — генера­лизованный хламидиоз зоонозной природы.

Орнитоз продолжается около месяца, хотя нередки и хронические формы.

Прогноз при своевременной диагностике и адекватном лечении, как правило, благопри­ятный. Однако возможны летальные исходы (в 2—3 % случаев).

Иммунитет.При орнитозе клеточно-гумо-ральный, нестерильный. Постинфекционный иммунитет непродолжительный и непрочный: реинфекция возможна уже через 0,5-2 года. Нередко также наблюдается длительное пер-систирование хламидий в организме и, следо­вательно, частые рецидивы болезни.

Микробиологическая диагностика.Материа­лом для исследования служит кровь (в первые дни заболевания), мокрота больного (на про­тяжении всего острого периода), сыворотка крови для серологического исследования.

Применяют биологический метод — куль­тивирование хламидий в желточном мешке куриного эмбриона, на белых мышах или в культуре клеток. Однако этот метод использу­ется редко из-за высокой опасности зараже­ния персонала.

Серологический метод диагностики ор­нитоза пока остается самым информатив­ным. Применяют РСК, РПГА, ИФА, ис­пользуя парные сыворотки крови больного.

Диагностически значимым является обнару­жение IgM в высоких титрах, а также не ме­нее, чем четырехкратное нарастание титра антител во второй сыворотке, взятой с интер­валом 7—10 дней после первой.

Поскольку при орнитозе возможно фор­мирование ГЗТ, применяют также внутри-кожную аллергическую пробу с орнитозным аллергеном (орнитином).

Лечение. С помощью антибиотиков (тетра-циклинов и макролидов).

Профилактика.Только Не специфическая: регулирование численности голубей, сани-тарно-ветеринарные мероприятия в птице­водстве, просветительская работа, соблюде­ние мер личной гигиены.

Специфическая профилактика.Не разрабо­тана.

Микоплазмы

Заболевания человека, вызываемые мико-плазмами, объединяют в группу микоплаз-мозов. Это антропонозные бактериальные инфекции, вызываемые микоплазмами, по­ражающими, в зависимости от вида возбу­дителя, органы дыхания или мочеполовой тракт и редко другие органы.

Возбудители этой группы инфекций — ми­коплазмы являются самыми мелкими свобод-ноживущими бактериями. Средний размер их клеток 0,27—0,74 мкм. Они привлекают большое внимание исследователей по двум причинам:

• из-за своей уникальной организации;

• в силу того, что очень часто контамини-руют культуры клеток, вызывают заболевания растений, животных и человека, оказывают

влияние на размножение ряда вирусов, в том числе онкогенных и ВИЧ, и сами способны вызывать иммунодефициты.

Микоплазмы относятся к клас­су Mollicutes, который включает 3 порядка (рис. 16.2): Acholeplasmatales, Mycoplasmatales, Anaeroplasmatales. Порядок Acholeplasmatales включает семейство Acholeplasmataceae с единственным родом Acholeplasma. Порядок Mycoplasmatales состоит из 2 семейств: Spiroplasmataceae с единственным родом Spiroplasma и Mycoplasmataceae, включающе­го 2 рода: Mycoplasma и Ureaplasma. Недавно выделенный порядок Anaeroplasmatales со­стоит из семейства Anaeroplasmataceae, вклю­чающего 3 рода: Anaeroplasma, Asteroplasma, Termoplasma. Термином «микоплазмы», как правило, обозначают все микробы семейств Mycoplasmataceae и Acholeplasmataceae.

Морфология.Отличительной особенностью является отсутствие ригидной клеточной стен­ки и ее предшественников, что обуславливает ряд биологических свойств: полиморфизм клеток, пластичность, осмотическую чувс­твительность, способность проходить через поры с диаметром 0,22 мкм, Резистентность к различным агентам, подавляющим синтез клеточной стенки, в том числе к пенициллину и его производным, множественность путей репродукции (бинарное деление, почкова­ние, фрагментация нитей, цепочечных форм и шаровидных образований). Клетки разме­ром 0,1—1,2 мкм, грамотрицательны, но луч­ше окрашиваются по Романовскому—Гимзе; различают подвижные и неподвижные виды. Минимальной репродуцирующейся единицей является элементарное тельце (0,7—0,2 мкм) сферическое или овальное, позднее удли­няющееся вплоть до разветвленных нитей. Клеточная мембрана находится в жидкокрис-

Класс Mollicutes
Порядок Порядок Порядок
Acholeplasmatales Anaeroplasmatales Mycoplasmatales
Семейство Семейство Семейство Семейство
Acholeplasmataceae Anaeroplasmataceae Spiroplasmalaceae Mycoplasmalaceae
Рол Acholeplasma Рол An-aeroplasma Рол As-teroplasma Род Ter-moplasma Род Spi-roplasma Род Ureaplasma Род Myco­plasma

таллическом состоянии; включает белки, мо­заично погруженные в два липидных слоя, основной компонент которых — холестерин. Размер генома наименьший среди прокариот (составляет 1/16 генома риккетсий); обладают минимальным набором органелл (нуклеоид, цитоплазматическая мембрана, рибосомы). Соотношение ГЦ-пар в ДНК у большинства видов низкое (25-30 мол.%), за исключением М. pneumoniae (39—40 мол.%). Теоретический минимум содержания ГЦ, необходимый для кодирования белков с нормальным набором аминокислот, равен 26 %, следовательно, ми-коплазмы находятся у этой грани. Простота организации, ограниченность генома опре­деляют ограниченность их биосинтетических возможностей.

Культуральные свойства.Хемоорганотрофы, у большинства видов метаболизм бродиль­ный; основной источник энергии — глюкоза или аргинин. Растут при температуре 22—41 «С (оптимум — 36—37 °С); оптимум рН — 6,8—7,4. Большинство видов — факультативные анаэ­робы; чрезвычайно требовательны к пита­тельным средам и условиям культивирования. Питательные среды должны содержать все предшественники, необходимые для синтеза макромолекул, обеспечивать микоплазмы ис­точниками энергии, холестерином, его про­изводными и жирными кислотами. Для этого используют экстракт говяжьего сердца и моз­га, дрожжевой экстракт, пептон, ДНК, НАД в качестве источника пуринов и пиримидинов, которые микоплазмы синтезировать не мо­гут. Дополнительно в среду вносятся: глюко­за — для видов, ферментирующих ее, мочеви­на — для уреаплазм и аргинин — для видов, не ферментирующих глюкозу. Источником фосфолипидов и стиролов служит сыворотка крови животных, для большинства микоп-лазм — сыворотка крови лошади.

Осмотическое давление среды должно быть в пределах 10—14 кгс/см2 (оптимальное зна­чение — 7,6 кгс/см2), что обеспечивается вве­дением ионов К+ и Na+. Виды, ферментирую­щие глюкозу, лучше растут при более низких значениях рН (6,0—6,5). Требования к аэрации различны у различных видов, большинство видов лучше растет в атмосфере, состоящей из 95 % азота и 5 % углекислого газа.

Микоплазмы культивируют на жидких, полужидких и плотных питательных средах. Некоторые виды, например М. pneumoniae, можно культивировать на стекле или плас­тике в виде монослоя, как культуры клеток. Большинство видов размножается медлен­но, культивирование продолжается несколь­ко дней или даже недель (М. pneunoniae, M.genitalium). M. hominis достигает начала стационарной фазы роста только через 48— 72 ч, титр культуры составляет 107—108 КОЕ/ мл, такой титр сохраняется в стационарной фазе роста в течение 5—7 суток культивиро­вания. Уреаплазмы имеют очень короткую стационарную фазу, их жизнеспособность резко падает уже через 24 ч, когда погибает приблизительно 90 % клеток, особенно в пло­хо забуференной среде. Бульонные культуры микоплазм слегка опалесцируют; уреаплазмы не вызывают помутнения среды даже при тит­ре 107 КОЕ/мл. В толще полужидкого агара микоплазмы и уреаплазмы образуют светлое облачко по ходу укола пипетки, заметное в проходящем свете. На плотных средах ми­коплазмы образуют характерные мелкие ко­лонии (0,1—0,3 мм) с приподнятым центром («яичница глазунья»), имеющие тенденцию врастать в среду и нежной, часто ажурной периферией; уреаплазмы образуют очень мел­кие колонии (0,01—0,03 мм в диаметре). Рост подавляется специфическими иммунными сыворотками.

Для культивирования пригодны куриные эмбрионы, которые погибают после 3—5 пас­сажей.

Биологические свойства микоплазм, вы­деленных от человека представлены в табл. 16.38.

Биохимическая активность.Низкая. Выделяют 2 группы микоплазм:

• разлагающие с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, маннозу, фруктозу, крахмал и гликоген («истинные» микоплазмы);

• восстанавливающие соединения тетразо-лия, окисляющие глутамат и лактат, но не ферментирующие углеводы.

Все виды не гидролизуют мочевину и эс-кулин. Основные биохимические свойства патогенных микоплазм представлены в табл. 16.39.

* а. у. — аэробные условия.

** ан. у. — анаэробные условия.

Уреаплазмы инертны к сахарам, не восста­навливают диазакрасители, каталазаотрица-тельны; проявляют р-гемолитическую актив­ность к эритроцитам кролика и морской свин­ки; продуцируют гипоксантин. Уреаплазмы секретируют фосфолипазы А1, A2и С; протеа-зы, селективно действующие на молекулы IgA и уреазу. Отличительная особенность метабо-

лизма — способность продуцировать насы­щенные и ненасыщенные жирные кислоты.

Антигенная структура.Сложная, имеет ви­довые различия; основные АГ представлены фосфо- и гликолипидами, полисахаридами и белками; наиболее иммунногенны поверх­ностные АГ, включающие углеводы в составе сложных гликолипидных, липогликановых и гликопротеиновых комплексов. Антигенная структура может изменяться после многократ-

ных пассажей на бесклеточных питательных средах. Характерен выраженный антигенный полиморфизм с высокой частотой мутаций.

М. hominis в мембране содержит 9 интег­ральных гидрофобных белков, из которых лишь 2 более или менее постоянно присутс­твуют у всех штаммов.

У уреаплазм выделяют 16 сероваров, раз­деленных на 2 группы (А и В); основные антигенные детерминанты — поверхностные полипептиды.

Факторы патогенности.Разнообразны и мо­гут значительно варьировать; основные факто­ры — адгезины, токсины, ферменты агрессии и продукты метаболизма. Адгезины входят в состав поверхностных АГ и обуславливают ад­гезию на клетках хозяина, что имеет ведущее значение в развитии начальной фазы инфек­ционного процесса. Экзотоксины в настоящее время идентифицированы лишь у нескольких непатогенных для человека микоплазм, в част­ности у М. neurolyticum и М. gallisepticum; мише­ни для их действия — мембраны астроцитов. Предполагают наличие нейротоксина у неко­торых штаммов М. pneumoniae, так как часто инфекции дыхательных путей сопровождают поражения нервной системы. Эндотоксины выделены у многих патогенных микоплазм; их введение лабораторным животным вызывает пирогенный эффект, лейкопению, геморраги­ческие поражения, коллапс и отек легких. По своей структуре и некоторым свойствам они несколькоотличаютсяотЛПСграмотрицатель-ных бактерий. У некоторых видов встречаются гемолизины (наибольшей гемолитической ак­тивностью обладает М. pneumoniae); большая часть видов вызывает выраженный (3-гемолиз, обусловленный синтезом свободных кисло­родных радикалов. Предположительно микоп-лазмы не только сами синтезируют свободные кислородные радикалы, но и индуцируют их образование в клетках, что ведет к окислению мембранных липидов. Среди ферментов агрес­сии основными факторами патогенности явля­ются фосфолипаза А и аминопептидазы, гид-ролизующие фосфолипиды мембраны клетки. Многие микоплазмы синтезируют нейрами-нидазу, которая осуществляет взаимодействие с поверхностными структурами клетки, со­держащими сиаловые кислоты; кроме того,

активность фермента нарушает архитектонику клеточных мембран и межклеточные взаимо­действия. Среди прочих ферментов следует упомянуть протеазы, вызывающие дегрануля-цию клеток, в том числе и тучных, расщепле­ние молекул AT и незаменимых аминокислот, РНКазы, ДНКазы и тимидинкиназы, нару­шающие метаболизм нуклеиновых кислот в клетках организма. До 20 % общей ДНКазной активности сосредоточено в мембранах мико­плазм, что облегчает вмешательство фермента в метаболизм клетки. Некоторые микоплазмы (например, М. hominis) синтезируют эндопеп-тидазы, расщепляющие молекулы IgA на ин-тактные мономерные комплексы.

Устойчивость в окружающей среде.Низкая, особенно у «урогенитальных микоплазм». Микоплазмы и уреаплазмы чувствительны к фторхинолонам, макролидам, цефалоспори-нам, азалидам и тетрациклинам; 10 % уреаплазм резистентны к тетрациклинам и макролидам. Чувствительны к действию обычно применяе­мых антисептиков и дезинфектантов.

Эпидемиология.Микоплазмы широко рас­пространены в природе. В настоящее вре­мя известно около 100 видов, они имеют­ся у растений, моллюсков, насекомых, рыб, птиц, млекопитающих, некоторые входят в состав микробных ассоциаций организма человека. От человека выделяют 15 видов микоплазм; их перечень и Биологические свойства приведены в табл. 16.38. A. ladlawii и М. primatum редко выделяются от человека; 6 видов: М. pneunoniae, M. hominis, M. genitalium, М. fermentans (incognitis), M. penetrans и U. urealyticum обладают потенциальной па-тогенностью. М. pneumoniae колонизирует слизистую оболочку респираторного тракта; М. hominis, M. genitalium и U. urealyticum — «урогенитальные микоплазмы» — обитают в урогенитальном тракте.

Источник инфекции — больной человек. Механизм передачи — аэрогенный, основной путь передачи — воздушно-капельный; восприимчи­вость высокая. Наиболее восприимчивы дети и подростки в возрасте 5—15 лет. Заболеваемость в популяции не превышает 4 %, но в закрытых кол­лективах, например в войсковых соединениях, может достигать 45 %. Пик заболеваемости — ко­нец лета и первые осенние месяцы.

Источник инфекции — больной человек; уреаплазмы инфицируют 25—80 % лиц, ве­дущих активную половую жизнь и имеющих трех и более партнеров. Механизм переда­чи — контактный; основной путь переда­чи — половой, на основании чего заболевание включают в группу ЗППП; восприимчивость высокая. Основные группы риска — прости­тутки и гомосексуалисты; уреаплазмы значи­тельно чаще выявляют у больных гонореей, трихомониазом, кандидозом.

Патогенез. Микоплазмы — мембранные паразиты. Они могут быть обнаружены лишь внутри тех клеток, которые способны к фагоцитозу, за исключением М. penetrans и некоторых штаммов M. fermentans, актив­но проникающих в клетки. Способность микоплазм паразитировать на мембране эукариотической клетки во многом определяет патогенез вызываемых ими ин­фекций, который включает формирование местных воспалительных и генерализованных аутоиммунных реакций. Микоплазмы проникают в организм, миг­рируют через слизистые оболочки и прикрепляются к эпителию сначала посредством неспецифического, а затем лигандрецепторного взаимодействия через сиалогликопротеиновые рецепторы, а также посредс­твом связывания поверхностных белков с различны­ми рецепторами. Микробы не проявляют выражен­ного цитопатогенного действия, но вызывают значи­тельные нарушения функциональных свойств клеток с последующим развитием местных воспалительных реакций. Взаимодействие с рецепторным аппаратом клеток может приводить к нарушению их антиген­ной структуры и запуску аутоиммунных процессов. Дефекты системы комплемента создают условия для персистенции возбудителя, что ведет к расстройствам гемостаза, повреждению эндотелия, гиперагрегации тромбоцитов, активации плазменных факторов свер­тывания и развитию синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания.

Клиника.Респираторный микоплазмоз может про­текать в форме ограниченной инфекции верхних дыха­тельных путей (назофарингит) либо по типу бронхита или пневмонии, а также различных внереспираторных проявлений, связанных с генерализацией инфекци­онного процесса, развитием аутоиммунных реакций и нарушением гемоциркуляции. М. pneumoniae — один из основных возбудителей легочных поражений, вы­зывает до 20 % всех пневмоний. Пневмонии проте­кают по типу интерстициальных и очаговых пора­жений; реже наблюдают сегментарные, долевые или

смешанные пневмонии. В тяжелых случаях разви­вается плеврит. Внереспираторные проявления: ге­молитическая анемия, неврологические расстройства (менингит, поражения периферического отдела ЦНС и черепно-мозговых нервов), осложнения со стороны сердечно-сосудистой системы (миокардиты) и опор­но-двигательного аппарата (реактивный артрит, спон-дилоартрит, ревматоидный артрит).

«Урогенитальные микоплазмы» вызывают ост­рые, но чаще хронические ГВЗ мочеполового трак­та. Доказана их роль в развитии негонококковых уретритов, спонтанных абортах, преждевременных родах, привычном невынашивании беременности, рождении детей с низкой массой тела и порока­ми развития, бесплодия мужчин и женщин. Вместе с тем микоплазмоносительство не всегда является показателем патологического процесса. Состояние иммунной системы, физиологическое состояние и гормональный фон человека, наличие других со­путствующих инфекций могут способствовать акти­вации репродукции «урогенитальных микоплазм» и развитию клинически выраженного патологического процесса.

Иммунитет.Развитие иммунного ответа не сопровождается формированием специфи­ческой резистентности; для респираторного и урогенитального микоплазмоза характерны случаи повторного заражения. Фагоцитоз не­завершенный, при отсутствии AT макрофаги не способны фагоцитировать микоплазмы, что обусловлено наличием микрокапсул, повер­хностных АГ, перекрестно реагирующих с АГ некоторых тканей организма человека (легкие, печень, головной мозг, поджелудочная железа, гладкая мускулатура и эритроциты).

В цитоплазме нейтрофилов возбудитель сохраняет свою жизнеспособность. Микоплазмы чувствитель­ны к компонентам комплемента, их дефицит или дефекты создают условия для персистенции возбуди­теля. Короткоживущие IgA определяют элиминацию возбудителя со слизистых оболочек; поликлональ-ная стимуляция лимфоцитов ведет к формирова­нию инфильтратов в легочной ткани, появлению перекрестно реагирующих AT и развитию ГЗТ. Для микоплазмоза характерно развитие аутоиммунных реакций. Инфекция М. fermentans сопровождается образованием AT к IgG (за счет связывания Fc-фраг-ментов), т. е. ревматоидного фактора, участвующего в повреждении клеток. Повреждение суставных тканей индуцируют AT, перекрестно реагирующие с АГ тка-

ней организма при повреждении целостности хряще­вой ткани и обнажении «скрытых» клеточных АГ.

Микробиологическая диагностика. При по­дозрении на респираторный микоплазмоз ис­следуют мазки из носоглотки, лаважную жид­кость, мокроту, бронхиальные смывы, а также мазки-отпечатки тканей органов мертворож­денных и абортированных плодов. При уроге-нитальных инфекциях исследуют срединную порцию утренней мочи, соскобы со слизистой уретры, сводов влагалища, цервикального ка­нала, материал, полученный при лапароско­пии, амниоцентезе, мазки-отпечатки тканей органов мертворожденных и абортированных плодов. При простатите исследуют секрет простаты, при мужском бесплодии — сперму. При заборе материала соблюдают те же пра­вила, как и при исследовании на хламидиоз.

Для лабораторной диагностики микоплаз-менных инфекций используют кулыпураль-ный, серологический и молекулярно-генетичес-кий методы (табл. 16.40):

При серодиагностике материалом для иссле­дования служат мазки-отпечатки тканей, со­скобы из уретры, цервикального канала и вла­галища, секрет простаты и сперма, в которых можно обнаружить АГ микоплазм в прямой и непрямой РИФ. Микоплазмы и уреаплазмы окрашиваются в ярко-зеленый цвет и выяв­ляются на поверхности анализируемых клеток в виде зеленых гранул, расположенных груп­пами или по одиночке, окрашенные зеленые гранулы могут располагаться в неклеточном пространстве. Цитоплазма клеток окрашива­ется в красно-бурый цвет. Результат считается положительным, если в препарате обнаружи­вают не менее 10 светящихся зеленых гранул, расположенных на мембране клеток.

АГ микоплазм могут быть обнаружены так­же в сыворотке крови больных. Для этого ис­пользуют реакцию агрегат-гемагглютинации (РАГА) и ИФА.

Особенность РАГА заключается в том, что для сенсибилизации эритроцитов используют агрегированные глютаровым альдегидом бел­ки иммунной сыворотки, при этом AT вводят­ся в состав трехмерных белковых комплексов, вследствие чего часть активных центров AT отдаляется от поверхности эритроцита и ста­новится более доступной для детерминант АГ.

Для серодиагностики респираторного ми-коплазмоза определяют специфические AT в парных сыворотках больного, диагностическое значение имеет сероконверсия в 4 раза и более. Определение AT при урогенитальных инфекци­ях имеет меньшее диагностическое значение, так как инфекция, как правило, имеет хроническое течение, а «урогенитальные микоплазмы» явля­ются слабыми антигенными раздражителями. Тем не менее и при урогенитальных микоплаз-мозах в ряде случаев проводят серодиагностику, AT определяют чаще всего в РПГА и ИФА.

Молекулярно-биологические методы диа­гностики включают гибридизацию на основе ДНК-зондов и ПЦР. Первый метод позволяет идентифицировать виды микоплазм при нали­чии 10 000-100 000 клеток на пробу. ПЦР поз­воляет выявить единичные клетки микоплазм.

Лечение.Антибиотиками. Направленная этиотропная химиотерапия обычно дает хоро­ший эффект, однако исчезновение клиничес­кой симптоматики часто не означает полную элиминацию возбудителя.

Профилактика.Специфическая профилак­тика отсутствует. Не специфическая профи­лактика направлена на ликвидацию источни­ка инфекции; на разрыв механизма и путей передачи; а также на повышение невоспри­имчивости коллектива к инфекции.

Дата добавления: 2016-02-04; просмотров: 2998;