Иммунологическая диагностика гельминтозов

Методы диагностики гельминтозов на современном этапе

Просмотров: 14505

Ершова И.Б., Осычнюк Л.М., Мочалова А.А., ГУ «Луганский государственный медицинский университет», кафедра педиатрии с детскими инфекциями.
Статья опубликована в журнале «Актуальная инфектология», №2 (3), 2014 год.
Информационный ресурс «Издательский дом Заславский» www.mif-ua.com
В статье изложены методы диагностики гельминтных инвазий: микроскопические, иммуноферментный анализ, серологические, полимеразной цепной реакции, биорезонансная диагностика, гемосканирование, а также инструментальные (ультразвуковое и рентгенологическое исследование, компьютерная томография) и лабораторные, имеющие косвенное значение (клинический анализ крови, анализ крови на печеночные пробы, анализ кала на дисбактериоз). Описаны достоинства методов, их недостатки, достоверность полученных данных. Предложены анкеты-опросники для пациентов для выявления риска инфицирования гельминтами. Описаны достоинства методов, их недостатки, достоверность полученных данных. Предложены анкеты-опросники для пациентов для выявления риска инфицирования гельминтами.
По данным Всемирной организации здравоохранения, основными паразитарными инфекциями на Земле инфицировано почти 4,5 млн человек. Но это только диагностированные случаи, реальная заболеваемость намного выше. Гельминтозы на сегодняшний день остаются наиболее распространенными паразитарными болезнями человека и имеют большое значение, особенно у детей .
Чаще гельминтозы встречаются в детском возрасте. Этому способствуют: широкая распространенность репродуктивного материала паразитов (цисты, яйца, личинки) в окружающей среде и недостаточное развитие у детей гигиенических навыков; наличие периодов транзиторного ослабления иммунитета после перенесенных острых респираторных заболеваний; пребывание в оздоровительных лагерях, туристические поездки и др. . Пики выявленных гельминтозов у детей отмечаются в следующие возрастные периоды — 2–3 года, 4–7 лет, 10–14 лет. Среди всех гельминтных инвазий преобладают аскаридоз, энтеробиоз, лямблиоз, трихинеллез, реже — описторхоз, трихоцефалез, стронгилоидоз, тениаринхоз, тениоз, гименолепидоз, дифиллоботриоз, токсокароз. В последнее время среди гельминтозов большое место занимают так называемые микст-инвазии, диагностика которых особенно трудна .
Гельминты оказывают отрицательное воздействие на организм человека. Они приводят к аллергизации, развитию полигиповитаминоза, макро- и микроэлементозов, нарушению кроветворения и проницаемости сосудов, гормональному дисбалансу. Гельминтозы способствуют формированию хронических заболеваний (холецистит, желчнокаменная болезнь, панкреатит, колит, сахарный диабет, бронхиальная астма, атопический дерматит), психоэмоциональных нарушений (хроническая усталость, раздражительность, тревожность, гиперактивность у детей), анемии и др. При длительной гельминтной инвазии может развиваться вторичный иммунодефицит .
Настороженность врачей в отношении гельминтозов у населения в настоящее время недостаточная, а профилактика сводится к лечению выявленных инвазированных пациентов.
Диагностика гельминтозов основывается на клинико-эпидемических и лабораторных данных. Такие признаки, как астенический синдром, рецидивирующая крапивница, нарушение регенерации кожи и слизистых оболочек, трудно поддающиеся лечению атопический дерматит и бронхообструктивный синдром, полилимфаденопатия и гепатоспленомегалия неясного генеза, аденоидные вегетации II–III степени, «географический» язык, сниженный или избирательный аппетит, неустойчивый стул, могут говорить о наличии гельминтов .
В настоящее время нет простого, доступного и надежного метода диагностики гельминтозов. Разработанные методики прямого визуального обнаружения (микроскопические исследования) требуют минимальной экспозиции диагностического материала, многократных повторных исследований. Личинки и яйца гельминтов, локализующиеся в желчевыводящих путях, печени, поджелудочной железе и двенадцатиперстной кишке, обнаруживают в дуоденальном содержимом и желчи. Гельминты, паразитирующие в кишечнике, выявляют с помощью различных методов исследования фекалий: копрограмма, метод толстого мазка фекалий по Като, метод обогащения, перианальный соскоб, метод Бермана, метод формалин-эфирного осаждения, обнаруживают яйца, личинки, цисты, ооцисты, трофозоиты. При подозрении на парагонимоз исследуют мокроту, на мочеполовой шистосомоз — мочу. Достоверность метода не превышает 15–20 %, результат зависит от стадии гельминтной инвазии, времени активности гельминтов, их концентрации в исследуемом материале, профессионализма лаборанта. Иногда положительного результата можно достичь с 8–10-го исследования. Например, неинформативность перианального соскоба при 1–2-кратном обследовании обусловлена периодичностью яйцекладки самками остриц. Особенность выделения цист лямблиями получила название «феномен прерывистого цистовыделения», при котором фазы массивного выделения цист сменяются отрицательной фазой, которая может длиться от 2–3 суток до 2–3 нед. В этот период обнаружить лямблии в кале невозможно .
Непосредственное выявление паразита не всегда возможно ввиду его тканевой локализации (трихинеллез, эхинококкоз, токсокароз).
Иммунологическое исследование крови позволяет определить наличие антигенов и антител к гельминтам, достоверность зависит от количества и жизненного цикла гельминтов в организме. Иммуноферментный анализ обладает высокой чувствительностью и специфичностью, которая составляет 90 %, дает возможность определения вида гельминтов, их количества, прослеживания динамики развития процесса, на который указывает уровень антител. Недостаток метода — можно обнаружить ограниченный круг паразитов — лямблии, описторхи, трихинеллы, аскариды, токсокары, токсоплазмы. Достоверность метода — 60–80 %, меньше — у лиц с иммунодефицитами .
При серологическом исследовании определяют наличие антител к гельминтам (достоверность — около 60 %): при подозрении на эхинококкоз, цистицеркоз, трихинеллез, токсокароз широко используют реакции непрямой гемагглютинации, агглютинации латекса, связывания комплемента, иммунофлюоресценции .
Не во всех случаях методы определения специфических антител обладают достаточной специфичностью и достоверностью. Антигенный состав гельминта зависит не только от вида, но и от стадии; проходя сложный цикл развития от яйца до взрослой особи, гельминты меняют антигенный состав. Кроме того, в иммунодиагностических реакциях используются соматические антитела, а в организме хозяина антитела вырабатываются в основном на экскреты и секреты гельминта. Неспецифическая сенсибилизация организма, общность некоторых антигенов трематод, простейших и человека создают высокий удельный вес ложноположительных реакций в титрах ниже достоверно диагностических .
Метод определения гельминтов с помощью полимеразной цепной реакции является высокоспецифичным и высокочувствительным, но из-за дороговизны и сложности не может быть скрининговым, когда, например, нужно обследовать группу детей из детского учреждения .
Иммунная система не всегда реагирует (распознает и уничтожает) на наличие гельминтов в организме. Это объясняется тем, что некоторые гельминты имеют прочную и химически устойчивую капсулу или покрыты веществом, которое не распознается иммунной системой; локализуются в тканях, наиболее защищенных от воспалительных реакций, например в спинном мозге; многие виды из них в пищеварительном тракте выделяют антиэнзимы, что спасает их от гибели; имеют большую продолжительность жизни (годами, а иногда до смерти самого человека); питаются за счет гликолиза чистых углеводов; имеют такие приспособления, как присоски, крючки и др., что способствует фиксации внутри организма; у многих видов существует половое размножение, при котором происходит обмен генной информацией, что приводит к усилению гетерогенной популяции, уменьшению уязвимости; обладают высоким уровнем плодовитости.
При ультразвуковом, рентгенологическом исследовании органов брюшной полости, компьютерной томографии можно выявить косвенные признаки гельминтозов: гепатоспленомегалию, неравномерность паренхимы печени и селезенки за счет мелких гиперэхогенных сигналов, увеличенные лимфатические узлы в воротах селезенки и сами гельминты (эхинококки, клубки кишечных гельминтов и т.д.).
Биорезонансная диагностика — современная энергоинформационная методика обследования, основанная на регистрации специальными датчиками электромагнитных колебаний с уникальным специфическим частотным спектром, которые способен испускать каждый гельминт. Биорезонансная диагностика позволяет обнаружить наличие паразитов на разных стадиях развития, указать их локализацию, определить степень повреждения органов. Характеризует состояние организма и улавливает предболезненные состояния, которые можно корректировать и не допустить болезни. Данный метод считается самым надежным, достоверность составляет 75–95 % .
Гемосканирование — качественное исследование крови с помощью мощного темнопольного микроскопа, можно увидеть состояние клеток крови (форму, размер, активность, цвет и т.д.), наличие неспецифических элементов и веществ — все это напрямую или опосредованно говорит о наличии в организме гельминтов. Изображение выводится на экран монитора с помощью встроенной видеокамеры в микроскопе. Этот метод диагностики обладает высокой достоверностью .
Косвенными лабораторными признаками гельминтозов могут быть анемия, базофилия, эозинофилия, увеличение уровня аспартатаминотрансферазы. Так, при токсокарозе выявляется лейкемоидная реакция эозинофилов (более 20 %) на фоне стойкого аллергического синдрома (атопический дерматит с выраженным зудом и резистентностью к традиционной терапии, тяжелая бронхиальная астма). Угнетение нормальной кишечной палочки в анализе кала на дисбактериоз также может говорить о возможном гельминтозе.
С учетом распространенности гельминтозов мы предлагаем анкету для определения риска инфицирования гельминтами.

  • Купаетесь в пресноводных водоемах.
  • Не моете руки перед едой с мылом в горячей воде.
  • Употребляете воду из непроверенных источников.
  • Употребляете в пищу домашнее сало с прожилками мяса.
  • Употребляете в пищу малосольную рыбу.
  • Употребляете в пищу слабопрожаренное мясо (с кровью).
  • Употребляете в пищу малосольную икру незаводского приготовления.
  • Не моете куриные яйца с мылом.
  • Не моете бананы, апельсины, мандарины перед употреблением.
  • Удобряете огород навозом.
  • Употребляете овощи прямо с грядки.
  • Употребляете фрукты и ягоды прямо с грядки.
  • Употребляете упавшие фрукты.
  • Не обдаете всю зелень кипятком для приготовления салатов.
  • Храните морковь в песке, взятом в дворе.
  • Ходите босыми ногами по траве.
  • У членов семьи были глистные инвазии.
  • В семье имеется собака или кошка.

За каждый ответ «да» — 2 балла, «иногда» — 1, «нет» — 0. При сумме баллов 0–5 вероятность инфицирования ничтожно мала, 6–12 — возможно инфицирование, 13–25 — высокая вероятность, более 25 баллов — очень высокая. При двух последних результатах необходимы регулярное обследование и, возможно, профилактическое лечение.
Поскольку клинические проявления гельминтозов не всегда специфичны, а в начальних стадиях — неспецифичны, мы предлагаем анкету для пациентов для самодиагностики гельминтозов.

  • Бывает зуд в области ануса по утрам.
  • Тошнота по утрам при чистке зубов.
  • Шелушение пальцев рук или ног со слущиванием пластов кожи.
  • Аллергическая сыпь на коже, кожный зуд.
  • Шелушение и отечность в области век.
  • Повышенная утомляемость, вялость, сонливость.
  • Повышенное чувство голода.
  • Чувство дискомфорта в животе.
  • Снижение массы тела.
  • Наличие нескольких хронических заболеваний органов желудочно-кишечного тракта, суставов, бронхолегочной системы.
  • Плохое самочувствие, отсутствие официального диагноза, длительное неэффективное лечение.
  • Периодический подъем температуры, сопровождающийся мышечными и суставными болями.

Ответ «да» по крайней мере на 2–3 вопроса говорит о высокой вероятности заражения гельминтами.
ВЫВОДЫ
1. На современном этапе нет лабораторных методов исследования на гельминтозы, которые обладают 100% надежностью.
2. Наибольшей достоверностью в диагностике гельминтозов обладают полимеразная цепная реакция и биорезонансная диагностика.
3. Для диагностики гельминтозов рекомендуется использовать комплекс лабораторно-инструментальных методов.

Глава III. Диагностика гельминтозов (Василькова, 1953г)

Полное содержание книги Основные гельминтозы человека и борьба с ними (З. Г. Василькова, 1953г) смотри

Глава III. Диагностика гельминтозов и методы гельминтологических исследований

При изучении клинической картины различных гельминтозов специфические явления, характерные для определенного гельминтоза и отличающие его от заболеваний иной этиологии, обычно не наблюдаются. Поэтому точный диагноз гельминтозов не может быть поставлен на основании только клинической картины, а должен подтверждаться лабораторными методами исследования, а также собиранием сведений о выделении паразитов (аскарид, остриц) или их фрагментов (члеников тениид).

Необходимо обследовать на гельминтозы всех больных, обращающихся за медицинской помощью, и особенно больных, обращающихся к педиатру, терапевту и невропатологу с жалобами на явления со стороны желудочно-кишечного тракта, нервной системы и с анемией. Если врач не всегда может применить лабораторные методы исследования, то опросить больного о выделении у него гельминтов обязан каждый медицинский работник, оказывающий помощь в амбулатории или стационаре.

При наличии приведенных в соответствующих главах клинических показаний следует уточнить диагноз при помощи лабораторных методов исследования на гельминтозы.

Диагноз гельминтозов ставится при обнаружении паразитов, их члеников или яиц (специальные методы исследования) и при наличии реакций, вызываемых гельминтами в организме хозяина (подсобные методы). Объектами исследования при гельминтозах являются: 1) испражнения, 2) выделенные паразиты, 3) ректальная и перианальная слизь, 4) содержимое подногтевых пространств, 5) дуоденальное содержимое, 6) мокрота, 7) кровь, 8) частицы тканей.

В связи с преобладанием кишечных гельминтозов наибольшее практическое значение имеет исследование испражнений.

Методы исследования испражнений на гельминтозы

Испражнения доставляются в лабораторию в чистой стеклянной посуде (около четверти стакана испражнений, взятых из разных мест одной порции); при плановом обследовании допускается доставка испражнений в лабораторию в спичечных или лубочных коробочках.

Для контроля дегельминтизации доставляется (по назначению врача) вся порция испражнений, собранная после приема противоглистного средства и слабительного (в больших закрытых стеклянных банках, ведрах).

Микроскопическое исследование испражнений является основным при диагностике кишечных гельминтозов; ему всегда должен предшествовать общий макроскопический осмотр фекалий для обнаружения члеников крупных цестод, остриц, аскарид и др.

Испражнения должны быть свежими или консервированными (в 5% растворе формалина), так как высыхание резко изменяет структуру яиц. Кроме того, при стоянии фекалий происходит быстрое развитие яиц некоторых гельминтов (например, анкилостом), что затрудняет диагностику.

Согласно инструкции Министерства здравоохранения СССР, необходимо исследовать испражнения одновременно по методу Фюллеборна и нативного мазка.

Нативный мазок

Нативный мазок: небольшой кусочек фекалий (с горошину), взятый спичкой, стеклянной или деревянной палочкой из разных мест доставленной порции, тщательно растирают на предметном стекле в капле 50% раствора глицерина или в физиологическом растворе, или в воде. Накрывают покровным стеклом, слегка надавливая последнее (препаровальной иглой). Мазок должен быть тонким, прозрачным и равномерным. Он применяется лишь как дополнение к другим методам, дающим обогащение препарата. Просматривать следует не менее двух препаратов.

С целью обнаружения личинок гельминтов (а также яиц их) нативный мазок делается следующим образом (по Шульману): 2-3 г фекалий тщательно размешивают «закручиванием» стеклянной палочкой в эмульсию с пятикратным количеством чистой воды или физиологического раствора. Во время размешивания личинки скопляются у стеклянной палочки, поэтому тотчас после окончания размешивания каплю эмульсии быстро переносят стеклянной палочкой на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют. С. Д. Любченко (1936) доказала, что метод закручивания является более эффективным, чем метод мазка, особенно в отношении яиц аскарид. На основании работы С. Д. Любченко мы считаем целесообразным заменить метод мазка методом закручивания.

Метод Фюллеборна

Метод Фюллеборна: 5-10 г фекалий, взятых из разных мест, помещают в баночку емкостью в 50-100 мл и тщательно растирают стеклянной или деревянной палочкой в насыщенном растворе поваренной соли (400 г этой соли растворяют в 1 л воды, нагревают до кипения и фильтруют через слой ваты или марли; раствор употребляется холодный: удельный вес 1,2). Раствор приливают постепенно, пока не получится равномерная суспензия, причем общее количество приливаемого раствора должно быть приблизительно в 20 раз больше количества фекалий. Для перемешивания фекалий Фюллеборн рекомендовал употреблять чайные стаканы, но удобнее готовить суспензию в баночках для мази емкостью в 50-100 мл, используя по две баночки на каждый анализ (или в стаканчиках емкостью в 100 мл).

Тотчас после приготовления суспензии с поверхности ее удаляют шпателем, металлическим совочком или кусочком чистой бумаги всплывшие на поверхность крупные частицы (растительные образования, непереваренные остатки пищи и пр), после чего смесь оставляют стоять на 1-1,5 часа. По истечении этого времени с поверхности смеси снимают всю пленку прикосновением проволочной или платиновой петли (плашмя) диаметром не больше 1 см, согнутой под прямым углом; пленку стряхивают на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Под каждое покровное стекло (18х18 мм) помещают 3-4 капли. Всего следует приготовить не менее 4 препаратов (на каждый препарат — одно покровное стекло). Петлю прокаливают на огне и промывают водой после каждого анализа.

По методу Фюллеборна быстро и легко обнаруживаются яйца всех нематод (за исключением неоплодотворенных яиц аскарид) и яйца карликового цепня.

Яйца трематод и крупных ленточных гельминтов всплывают плохо, поэтому в районах широкого распространения этих гельминтов рекомендуется дополнительно просматривать 2-4 препарата со дна смеси. После снятия пленки с поверхности смесь выливают из посуды, оставляя на дне небольшой слой ее; 4-6 капель осадка переносят пипеткой или платиновой петлей на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют. Для просветления к капле осадка прибавляют каплю глицерина.

Таблица. Сравнительные данные о форме и размере яиц гельминтов

Вид паразита Форма, строение и размеры (в микронах) яиц Фото
Аскарида (Ascaris lumbricoides) оплодотворенное яйцо Овальная (реже шаровидная) форма, толстая, многослойная обо­лочка; наружная белковая оболочка крупнобугристая, окрашивающаяся в темножелтый цвет пиг­ментами испражнений. Внутри яйца мелкозернистый, шаровидный бластомэр, занимающий все яйцо за исключением полюсов. Размер: 50-70X40-50. Иногда яйца аскариды встречаются без белковой оболочки; они прозрачные, бесцветные или серозеленоватого оттенка и покрыты ровной, толстой оболочкой.
Аскарида (Ascaris lumbricoides) неоплодотворенное яйцо Удлиненная, вытянутая, иногда трехгранная, грушевидная, непра­вильная форма; белковая оболоч­ка — тонкая, мелкобугристая, упло­щенная на полюсах, желтоватого цвета. Все содержимое яйца запол­нено крупными полигональными желточными клетками (от полюса до полюса). Размер: 50-106X40-50.
Власоглав (Trichocephalus trichiurus, прежнее название — Trichocephalus dispar) Яйцевидная, бочонкообразная фор­ма; толстая, многослойная оболочка золотистожелтого или коричневого цвета (от пигмента испражнений). На полюсах имеются бесцветные, прозрачные, пробковидные образования; внутри яйца — мелкозернистое содержимое. Размер: 50-54X22-23.
Острица (Enterobius vermicularis, прежнее название Oxyuris vermicularis) Неправильная яйцевидная форма; тонкая, гладкая, бесцветная, многослойная оболочка; одна сторона уплощена, другая выпукла. Внутри яйца — зародыш на разной стадии развития, вплоть до личинки. Размер: 50-60X20-30.
Анкилостома (Ancylostoma duodenale и Necator americanus — диагностика этих двух видов по яйцам затруднительна) Правильная, овальная форма; тон­кая, прозрачная, бесцветная оболоч­ка. Внутри свежеотложенных яиц 4 бластомера, лежащих а центральной части яйца. Размер: 54-70X36-40.
Трихостронгилус (Trichostrongylus sp. — виды этого рода, встре­чающиеся у человека, по яйцам не диагносцируются) Овальная, яйцевидная форма; тонкая, прозрачная, бесцветная оболоч­ка с одним тупым закругленным и другим острым концом. Внутри свежевыделенных яиц 16-30 бластомеров. Размер: 73-80X40-43.
Бычий цепень (Taeniarhynchus saginatus, прежнее название Taenia saginata) и свиной цепень (Taenia solium) Шаровидная форма, яйцевая обо­лочка с 1-2 нитями. Внутри яйца онкосфера (зародыш) с толстой радиально исчерченной оболочкой, темнокоричневого цвета, с 6 эмбриональными крючочками внутри. Раз­меры онкосферы 31X40. Бычий и свиной цепень по строению яиц не различимы. В испражнениях чело­века встречаются не яйца, а онкосферы.
Карликовый цепень (Нуmenolepis nana, прежнее название — Tae­nia nana) Овальная форма; тонкая бесцвет­ная оболочка с лимоноподобной онкосферой внутри, от полюсов которой отходят длинные нитевидные придатки (филаменты); размер 40Х50. В онкосфере 6 зародышевых крючочков.
Лентец широкий (Diphyllobothrium latum, прежнее название Bothriocephalus latus) Яйцевидная форма; толстая, глад­кая оболочка серого или темнобурого цвета; внутри яйца крупнозернистое содержимое, на верхнем полюсе — крышечка, на противопо­ложном — бугорок (утолщение скор­лупы). Размер: 68-71X45.
Описторхис (Opisthorchis Felineus, прежнее название Distomum sibiricum) Яйцевидная форма; тонкая глад­кая оболочка бледножелтого цвета, с крышечкой на верхнем полюсе и с шипиком на противоположном полюсе. Нижняя половина яйца рас­ширена, внутреннее содержимое яйца мелкозернистое. Размер: 26-32X11-15.
Дикроцелиум — (Dicrocoelium lanceatum, прежнее название — Dicrocoelium lanceolatum) Яйцевидная форма; толстая глад­кая оболочка желтого или темнокоричневого цвета, с крышечкой на верхнем полюсе; одна сторона уплощена и слегка вогнута. Внутри яйца две крупные желточные клетки.Размер: 38-45X25-30.
Фасциола (Fasciola hepatica, прежнее название — Distomum hepaticum) Яйцевидная, правильная форма, тонкая гладкая оболочка желтого цвета, с крышечкой на верхнем по­люсе. Внутри яйца — многочисленные желточные клетки. Размер: 130-145X70-90.

Метод Бермана

Метод Бермана применяется для исследования испражнений на личинки гельминтов (при стронгилоидозе). Этот метод заключается в следующем: 5 г фекалий на металлической сетке (для этих целей удобна цедилка для молока) помещают на стеклянную воронку, прикрепленную к штативу. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку с зажимом.

Сетку с калом приподнимают и в воронку наливают нагретую приблизительно до 50° воду таким образом, чтобы нижняя часть сетки с калом была погружена в воду. Личинки активно переходят в воду и скопляются в нижней части резиновой трубки. Через 2-4 часа открывают зажим и жидкость спускают в одну или две центрифужные пробирки.

После центрифугирования в течение 1-2 минут верхнюю часть жидкости быстро сливают, а осадок наносят каплями на предметные стекла и исследуют под покровными стеклами или распределяют тонким слоем на 2-3 больших стекла и тогда исследуют без покровных стекол.

Метод Бермана применяется также и для исследования почвы на наличие личинок анкилостом.

Метод Столла

Метод Столла применяется для определения интенсивности инвазии. В специальную стеклянную колбочку наливают децинормальный раствор едкого натра до метки 56 см3, а затем прибавляют испражнения до тех на пор, пока уровень жидкости не достигнет 60 см3, т. е. 4 см3. После взбалтывания со стеклянными бусами берут для исследования 0,075 мл смеси и исследуют под одним-двумя обычными покровными стеклами. Полученную сумму умножают на 200, чтобы получить количество яиц, содержащихся в 1 см3 испражнений.

Исследование дуоденального содержимого

Дуоденальный сок и пузырную желчь, полученные обычным путем при помощи зондирования (а пузырную желчь и после рефлекса с желчного пузыря), тщательно смешивают с равным объемом этилового эфира; смесь центрифугируют, после чего осадок исследуют под микроскопом. Помимо осадка, микроскопическому исследованию обязательно подвергаются плавающие в жидкости хлопья, в которых могут находиться яйца гельминтов. При исследование на яйца гельминтов желудочного сока и рвотных масс можно пользоваться этой же методикой.

Исследование дуоденального сока и содержимого желудка необходимо производить при подозрении на глистные заболевания печени, желчного пузыря (описторхоз, фасциолез, дикроцелиоз) и двенадцатиперстной кишки (стронгилоидоз).

Исследование мокроты

Мокроту растирают по стеклянной пластинке, плотно накрывают другой стеклянной пластинкой и рассматривают невооруженным глазом на светлом и черном фоне, а также под лупой при проходящем свете. Отдельные кусочки мокроты («ржавые» скопления, обрывки тканей и пр.) наносят тонким слоем на предметное стекло, плотно накрывают его покровным и исследуют при малом и большом увеличении микроскопа.

Анализ мокроты следует производить при подозрении па эхинококкоз легких, парагонимоз и аскаридозную пневмонию. В мокроте могут быть обрывки оболочки эхинококковых пузырей с головками эхинококков, крючья эхинококков, личинки аскарид и яйца парагонимусов (трематод, паразитирующих в легких).

Исследование тканей на цистицеркоз и трихинеллез

а) Для диагносцирования цистицеркоза кожи, подкожной клетчатки или мышц, асептически вырезанный кусочек соответствующей ткани исследуют сначала не вооруженным глазом. Участки тканей раздвигают при помощи препаровальных игл с целью обнаружения видимого простым глазом пузырька — цистицерка (фото А); длина его 6-20 мм, ширина 5-10 мм. При обнаружении пузырька, подозрительного на цистицерк, он раздавливается между двумя предметными стеклами и рассматривается под микроскопом. Цистицерк (Cistycercus cellulosae) определяется по наличию сколекса с четырьмя присосками и венчиком крючьев (фото Б).

Фото. А — цистицерки с вывернутыми наружу сколексами; Б — Головка свинного цепня.

б) Для диагносцирования трихинеллеза асептически вырезанный кусочек мышцы (двуглавой или икроножной) тщательно измельчают в 50% растворе глицерина на тончайшие волоконца с помощью препаровальных игл. Измельченные мышцы сдавливаются между двумя предметными стеклами и исследуются при малом увеличении микроскопа в затемненном поле зрения. Исследование мышц на трихинеллез рекомендуется производить не ранее чем на 8-й день заболевания. Личинки трихинелл находятся в мышцах в свернутом спиралью положении: они заключены в лимонообразные капсулы.

Фото. А — Личинки трихинелл в мышцах; Б — Обызвествленные капсулы трихинелл.

Рентгеноскопия

Наиболее часто рентгеноскопия применяется для диагносцирования эхинококкоза и реже — цистицеркоза. Цистицерки обнаруживаются при рентгеноскопии только после обызвествления (в случаях длительного заболевания). За последние годы рентгеноскопия применяется и для диагносцирования аскаридоза как в ранней личиночной стадии, так отчасти и в кишечной стадии.

В период миграции личинок аскарид (и анкилостомид) в легких выявляются нестойкие, иногда множественные воспалительные очаги; одновременно в крови появляется значительная эозинофилия.

Половозрелые аскариды хорошо видны при рентгеноскопии кишечника пораженных лиц. Этот метод, несмотря на его сложность и громоздкость, должен быть использован как дополнительный для диагностики аскаридоза в случаях с отрицательным копрологическим анализом. По данным Е. С. Геселевич, из 180 больных аскаридозом, выявленных при рентгеноскопии, у 54 в кале не было обнаружено яиц аскарид (смотри ).

Метки: Василькова глисты

Виды исследований по диагностике гельминтозов у человека

Паразитов в организме имеет около 7 человек из 10, хотя степень поражения разная. Некоторые люди даже не подозревают, что внутри них живут паразиты, и годами мучаются от токсических выделений личинок и взрослых особей. Другие, заподозрив что-то неладное, сразу бегут к врачу и правильно делают – своевременная диагностика гельминтозов уменьшает риск возможных осложнений.

Кратко о глистах

На сегодняшний день известно около 300 разновидностей глистов. Человек является конечным звеном во всей биологической жизни гельминта. Иногда они самостоятельно покидают организм своего «хозяина». Заражение инвазиями происходит через плохо вымытые продукты питания, руки, при контакте с зараженным человеком или животным.

Выделяют три основных вида глистных инвазий:

  • кишечные – например, стронгилоидоз;
  • легочные (томинксоз);
  • тканевые (филяриатоз) и прочие.

Основные симптомы наличия паразитов в организме

Помимо медицинских исследований существует множество предпосылок, которые подскажут человеку, что у него в организме есть глисты.

Велика вероятность поражения организма паразитами при следующих признаках:

  • у человека происходит резкое снижение массы тела, однако он нормально питается;
  • ощущение апатии, постоянная вялость и слабость;
  • частый рвотный рефлекс, но без рвоты;
  • постоянные высыпания по всему телу или на лице;
  • понос или запоры.

Существующие диагностические мероприятия

Диагностика глистов у человека разделяется на две категории исследований – прямые и косвенные. Последняя категория дает повод, что следует провести прямые исследования, так как велика вероятность наличия паразитов.

Методы диагностирования:

  • исследование кала – заметить глистные инвазии в кале можно и невооруженным взглядом макроскопическим лабораторным исследованием;
  • микроскопические методы применяются в тех случаях, когда не получилось обнаружить гельминтов в кале;
  • биопсия – исследуются ткани мышц;
  • компьютерное диагностирование;
  • получение иммунологического статуса;
  • диагностика веществ, находящихся в двенадцатиперстной кишке и желчном пузыре;
  • инструментальная диагностика.

Порядок проведения диагностирования

Сначала сдается анализ крови, при котором можно выявить реакции организма пациента, схожие с аллергией. В общем анализе крови показателем наличия инвазий является повышение эозинофилов и сдвиг лейкоцитарной формулы влево. Когда человек здоров, число эозинофилов равняется 0-1. Если результаты забора крови неутешительны, то проводятся микро- и макроскопические исследования кала для обнаружения яиц гельминтов.

Макроскопический анализ предполагает исследование при помощи чашки Петри и определение наличия круглых червей.

Микроскопическое исследование еще называют методом «толстой капли». Его придумал ученый Като. Диагностика проводится комплексно, так как макроскопическое обследование не позволяет обнаружить всех видов паразитов.

Метод диагностики иммунологического статуса подразумевает исследование сыворотки крови, которое позволяет обнаружить специфические антитела по отношению к отдельным видам гельминтов. При подозрении, что глистные инвазии поразили мышечные ткани, проводится инструментальная диагностика, или биопсия. Таким способом очень быстро определяется наличие трихинеллеза.

При специфическом поражении гельминтами (например, если есть подозрения, что они «добрались» до желчного пузыря), используются специальные методы диагностики.

Существует ПЦР-диагностика, которая основана на анализе ДНК. Данный метод предполагает выявление самых простейших инвазий, но их количество и степень поражения организма невозможно определить.

Компьютерная диагностика глистных инвазий

ВАЛЕО-диагностика

Теория диагностики гельминтов основана на том, что любой предмет на планете имеет волновую природу, но все волны разные и отличаются друг от друга. В компьютерной программе занесены характеристики всех человеческих органов. Если есть какие-либо отклонения от нормы, то можно диагностировать не только само заболевание, но и скрытые формы. ВАЛЕО-диагностика позволяет не только обнаружить глистов, но и оценить состояние всего организма. Вся процедура безболезненная и длится около 120 минут.

Гемосканирование

Методика еще называется «живой» каплей крови. У пациента забирается кровь, и под огромным увеличением микроскопа больной ее видит. Все уведенное разъясняет доктор. Методика позволяет выявить простейших паразитов, личинки и другие заболевания.

Частотная диагностика «Оберон»

«Оберон» – это прибор, который позволяет проводить нелинейные анализы. После постановки диагноза при помощи аппарата может быть назначено лечение.

Лабораторные исследования

Исследования кала

Простая методика состоит из рассмотрения под микроскопом пробы, то есть комочка кала, размером не больше спичечной головки. Если яйцо обнаружено, то потребуется использование сильного объектива с увеличением 40 х.

Метод «толстого» мазка по Като

Хотя и обычный способ дает неплохие результаты, но если глистов очень мало, то приходится повышать концентрацию яиц в одном мазке. В этом случае специалист берет фекалии размером с горошину, наносит на стекло и покрывает целлофаном, равномерно распределив пробу под пленкой.

Метод Калантарян

Используют флотационный раствор или нитрит аммония. В емкость помещают фекалии объемом до 10 г. Если есть яйца глистов, то они не выдержат агрессивной среды и обязательно всплывут.

Метод Красильникова

Вместо солевого раствора данный способ подразумевает использование детергента, который в обычной жизни используется как моющее средство. Емкость с фекалиями и раствором оставляется на сутки или помещается в центрифугу не более чем на пару минут. В итоге на дне емкости появляется три слоя осадков: первый – самые тяжелые частицы, второй – гельминты, последний – самые легкие частицы.

Применятся в том случае, если необходимо выявить яйца трематод. Они достаточно тяжелые, поэтому не всегда можно определить их другими методами.

Повторное отстаивание

Суть метода состоит в том, что кал смешивается с водой, процеживается и отстаивается. Затем все повторяется до того момента, пока верхний слой не станет прозрачным. С полученных осадков делаются мазки и микроскопируются. Способ лучше всего подходит для выявления яиц трематод.

Дуоденальное содержимое

Используется мазок желчи и дуоденального содержимого, в котором могут присутствовать яйца глистов. Такой метод позволяет выявить паразитов, если они находятся в печени и двенадцатиперстной кишке, поджелудочной железе.

Анализ мочи является достаточно показательным методом диагностики. В ней можно обнаружить личинки или яйца аскарид, их отдельные части. Чтобы это выявить, используются нативные мазки.

Дополнительные диагностические методы

Преимущество ультразвуковых исследований или косвенный методов исследования брюшной полости, поджелудочной железы и печени – абсолютная безопасность для организма человека, что позволяет проводить его множество раз, не переживая из-за возможных осложнений.

Если точно известно, что гельминты есть, то при помощи УЗИ можно определить место локализации паразитов. Также при проведении УЗИ конкретного органа у врача могут возникнуть подозрения, что заболевание, не имея явных признаков, все же есть. В таких случаях рекомендуется проведение обследований на предмет наличия гельминтов.

Увеличение размера печени и поджелудочной железы может быть свидетельством того, что есть глистные инвазии. Поджелудочная железа не только увеличивается в размере, но и имеет неравномерную структуру, уплотнения. В печени глисты могут стать причиной гепатита.

Непроходимость желчных протоков и/или увеличение протоков печени, нарушение подвижности органов – косвенные признаки того, что в организме есть глисты.

Каждый пациент должен понимать, что УЗИ – это только одна из частей комплексной диагностики поражения организма глистными инвазиями.

В заключение

Любое лечение должно основываться на профилактических мероприятиях. Обязательно мойте руки и продукты питания, учите своих детей правилам гигиены и сами ее соблюдайте. Если есть характерные для гельминтоза симптомы, обязательно обратитесь к врачу, пройдите все необходимые обследования и незамедлительно начинайте лечение.

ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ

Прежде чем проводить лечебно-профилактические мероприятия при определенных гельминтозах сельскохозяйственных и промысловых животных, необходимо своевременно поставить точный диагноз болезни. Существуют две группы методов диагностики гельминтозов — прижизненные и посмертные. Кроме того, надо уметь дифференцировать гельминтозы и другие инвазионные, а также инфекционные заболевания.

Прижизненная диагностика гельминтозов

Диагноз на гельминтозы при жизни животных ставят на основании результатов лабораторных методов исследований и диагностических дегельминтизаций (прямых методов), а также иммунологических реакций (косвенных методов). Подсобную роль в диагностике гельминтозов играют результаты исследований промежуточных хозяев (при биогельминтозах), клинические симптомы и эпизоотологическне данные.

Основные методы диагностики — лабораторные исследования, позволяющие часто обнаруживать возбудителей гельминтозов или их яйца и личинки в экскретах (фекалиях, моче, мокроте), секретах (желчи), тканях (крови, мышцах), органах (кусочках кожи), в содержимом пунктатов и абсцессов.

Лабораторные методы диагностики гельминтозов животных легко выполнимы и достаточно точны, поэтому их широко применяют в производственных условиях (в ветеринарных лабораториях и в других ветеринарных учреждениях). В зависимости от целевого назначения лабораторные исследования подразделяют на гельминтоовоскопическне, гельминтоларвоскопические и гельминтоскопические методы исследований.

  1. Гельминтоовоскопические методы исследований позволяют выявлять в экскретах, секретах и соскобах яйца многих паразитических червей. Широко применяется в ветеринарной практике исследование проб фекалий по Фюллеборну, последовательного промывания и др.
  2. Гельминтоларвоскопические методы исследований используют для обнаружения личинок гельминтов (диктпокаулов, мюллерий и др.). Из этой группы нередко применяют исследование фекалий методами Бермана — Орлова, Вайда и др.
  3. Гелъминтоскопические, или макрогельминтоскопические, исследования применяют с диагностической целью для обнаружения выделяемых наружу гельминтов или их фрагментов (члеников цестод). В практических условиях этим способом диагностируют аскаридоз свиней, цестодозы (мониезиоз жвачных, дрепанидотениоз гусей, тениндозы плотоядных).

Из лабораторных методов диагностики гельминтозов животных большое практическое значение имеют:

  • а) гельминтокопрологические исследования (исследование фекалий),
  • б) исследование выделений других органов и др.

Гельминтокопрологические исследования

Большинство гельминтов, паразитирующих у животных, выделяют во внешнюю среду через желудочно-кишечный тракт яйца, личинок и фрагменты тела (членики). Поэтому гельминтокопрологические исследования являются основными методами прижизненной диагностики гельминтозов. Плановые гельминтокопрологические обследования животных в хозяйствах проводят два раза в год: первый раз в марте — апреле и второй в ноябре — декабре.

Пробы фекалий берут от двух-трех возрастных групп. Например, на свиноферме обследуют копрологически 3-4-месячных поросят, 5- 7-месячных подсвинков и взрослых свиноматок. От каждой возрастной группы берут по 15-25 проб фекалий. Результаты гельминтокопрологических исследований во многом зависят от правильности отбора и упаковки проб и своевременной доставки их и ветеринарную лабораторию. Для упаковки фекалий используют кульки и пакетики из целлофана и плотной бумаги. Жидкие фекалии можно пересылать в небольших баночках (бактериологические пробирки непригодны). Для исследований пригодны только свеже выделенные фекалии. Их берут у крупных животных из прямой кишки рукой в резиновой перчатке; от свиней, телят, овец и коз фекалии следует брать средним и указательным пальцем в напальчниках.

Для этих же целей предложены специальные приборы, использование которых облегчает труд ветеринарных работников и повышает производственную культуру этой манипуляции.

Предложены большой и малый приборы конструкции Н. И. Ложкина, состоящие из стальных браншей, переходных ветвей и двух прикрепленных к ветвям полусферических поверхностей (рис. 1). Полусферическую часть прибора, тщательно промытую водой, осторожно вводят в прямую кишку животного.

У кроликов фекалии в количестве нескольких шариков извлекают путем надавливания на брюшную стенку в области прямой кишки. Иногда допускается брать фекалии с пола, если они свежие и известно от какого животного. От одного животного берут не менее 10-20 г фекалий. От птиц, пушных зверей, собак, кошек и диких хищников (в зоопарках) фекалии собирают с чистого пола клеток (групповые пробы).

Все пробы фекалий этикетируют:

  1. по краю пакета или листа бумаги (где он не будет соприкасаться с экскрементами) пишут номер пробы (кличку коров).
  2. К пробам фекалий прилагают опись, где указывают наименование хозяйства, бригады, вид, пол и возраст животных (для взрослых — кличку или инвентарный номер) и дату взятия проб.
  3. В сопроводительной следует указать цель исследований фекалий (например, для контроля проведенной дегельминтизации против фасциолеза).

Необходимо как можно быстрее доставить пробы фекалий в ветеринарную лабораторию и исследовать их без задержки, потому что при комнатной температуре через 16- 20 ч из яиц кишечных стронгилят выходят личинки, что затрудняет диагностику диктиокаулеза жвачных. Результаты исследования регистрируют в специальном журнале, в котором, кроме порядкового номера, вида, клички (номера) животного, метода и результатов исследования, обязательно отмечают возраст животного и интенсивность инвазии (количество яиц и личинок в препарате или в трех каплях взвеси).

Оборудование для гельминтокопрологических исследований. Состав лабораторного оборудования (оптические приборы, аппараты, посуда, инструменты н другие предметы) и его стандартность оказывают существенное влияние на качество гельминтокопрологических исследований. Чем оно совершеннее, тем достовернее результаты исследования фекалий.

На Украине разработай и внедрен в ветеринарную практику республики набор стандартного оборудования для проведения массовых лабораторных обследований животных на наличие яиц и личинок паразитических червей. Набор составлен из стандартных предметов, изготовленных из удобного, прочного, транспортабельного и гигиенического материала — полистирола белого цвета.

  • В этот набор входят 50 стаканов полуконической формы емкостью 175 мм (для методов осаждения),
  • 50 стаканчиков цилиндрической формы емкостью 75 мл (для методов флотации),
  • 50 маленьких стаканчиков полуконической формы емкостью 50 мл (для упрощенного метода ларвоскош),
  • ситечки к стаканчикам трех размеров, воронки среднего размера (для метода Бермана — Орлова),
  • а также другие предметы (рис. 2).

Данный набор повышает достоверность исследования проб фекалий и производительность труда работников ветеринарных лабораторий, улучшает эстетическую сторону этой работы, позволяет в широких масштабах контролировать эффективность проводимых дегельминтизаций, а также оздоровительных противогельминтозных мероприятий в хозяйствах.

Методы гельминтокопрологических исследований разделяют на качественные методы, позволяющие установить, какими видами гельминтов заражено животное, и количественные, дающие возможность судить об интенсивности инвазии, то есть степени зараженности животного тем или иным видом паразитических червей.

Качественные методы гельминтокопрологических исследований.

Гельминтоовоскопические методы. В ветеринарных лабораториях пробы фекалий животных наиболее часто исследуют гельминтоовоскопическими методами. Их делят

  1. на простые (метод нативного мазка) и
  2. методы концентрации яиц гельминтов (флотации, осаждения и комбинированные).

Метод нативного мазка. В ветеринарной практике имеет ограниченное применение, вследствие низкой его эффективности. Яйца паразитических червей удается обнаружить только при высокой и средней интенсивности инвазии. На предметное стекло наносят каплю равных частей воды и глицерина и небольшой кусочек фекалий (с булавочную головку), тщательно перемешивают стеклянной или деревянной палочкой; после удаления твердых частиц на эту смесь кладут покровное стекло и исследуют под микроскопом. Глицерин просветляет препарат и препятствует быстрому высыханию его. Рекомендуют исследовать 5-10 препаратов (капель). Этот метод используют в качестве дополнительного к другим методам.

Методы концентрации яиц гельминтов разделяются на три группы, в зависимости от соотношения плотности яиц гельминтов и жидкости, в которой взвешены пробы фекалий животных.

Методы флотации. При методах флотации (всплывания) используют насыщенные растворы солей с более высокой плотностью (1,18-1,50), чем яйца паразитических червей. В лабораторной практике из флотационных жидкостей наиболее часто применяют насыщенный раствор натрия хлорида, или поваренной соли (плотность 1,18-1,2 при комнатной температуре). Для приготовления такого раствора в кастрюлю или ведро с кипящей водой постепенно всыпают при помешивании поваренную соль до образования на дне небольшого осадка (380-400 г на 1 л воды). Горячий раствор фильтруют через несколько слоев марли в бутыль и применяют после охлаждения (на дне бутыли должен образоваться кристаллический осадок).

При диагностике некоторых гельминтозов используют также насыщенные растворы технической (гранулированной) селитры, или аммония нитрата с плотностью 1,32 (1500 г на 1 л кипящей воды), натриевой селитры, или натрия нитрата с плотностью 1,38 (соотношение соли и горячей воды 1:1), английской соли, или магния сульфата с плотностью 1,26-1,28 (920 г на 1 л горячей воды), натрия тиосульфата, или гипосульфита натрия, плотность которого колеблется от 1,38 до 1,40 (1750 г на 1 л кипящей воды), а также нитрата свикца с плотностью 1,5 (650 г на 1 л горячей воды). В последнем растворе всплывают яйца всех паразитических червей, включая яйца трематод, но деформируется оболочка яиц фасциол и парамфистомид.

Для определения плотности насыщенных растворов солей используют денсиметр.

Метод Фюллеборна. В полистироловый, пластмассовый пли стеклянный стаканчик емкостью 75-100 мл помещают пробу фекалий массой Зги постепенно добавляют 50- 75 мл насыщенного раствора натрия хлорида порциями при тщательном размешивании взвеси стеклянной палочкой. Плотные фекалии овец (коз и кроликов) предварительно растирают с небольшим количеством раствора соли в фарфоровой ступке, после чего суспензию переливают в стаканчик, добавив при помешивании необходимое количество флотационной жидкости. Всплывшие крупные частицы сразу удаляют, а взвесь фекалий фильтруют в другой стаканчик через нержавеющее металлическое или капроновое ситечко с диаметром ячеек 0,3-0,5 мм.

Во время отстаивания заряженной пробы яйца многих видов нематод и цестод всплывают на поверхность. Через 45 мин проволочной или спиральной петлей (диаметр 0,8- 1 си) снимают три капли поверхностной пленки и помещают их на предметном стекле. Не накрывая капли покровными стеклами, просматривают их под малым увеличением микроскопа при опущенном вниз конденсоре. Число обнаруженных яиц каждого вида гельминта в трех каплях подсчитывают. Метод Фюллеборна прост, дешев, удобен и сравнительно эффективен при многих нематодозах, поэтому его широко применяют в лабораториях и в других ветеринарных учреждениях.

Методы осаждения. При методах осаждения (седиментации) пробы фекалий смешивают с водой, плотность которой меньше яиц паразитических червей.

Метод последовательного промывания. Пробу фекалий массой 3-5 г кладут в стакан (плотные фекалии овец предварительно растирают в ступке с небольшим количеством воды) и добавляют порциями 15-кратное количество воды, размешивая взвесь до равномерной консистенции. Смесь фильтруют через ситечко в стакан емкостью 175- 200 мл, доливают воду при помешивании почти до краев стакана, после чего фильтрат отстаивают 5 мин (до образования осадка). Затем верхний слой жидкости сливают или отсасывают спринцовкой до осадка, а к осадку снова добавляют такое же количество воды, перемешивают и отстаивают 5 мин, после чего жидкость сливают или отсасывают до осадка. Такие манипуляции повторяют до просветления надосадочного слоя воды в стакане. Последний раз надосадочный слой сливают, а осадок наносят на большое предметное стекло (7X10 см) и исследуют под микроскопом. Этот метод часто применяют для диагностики трематодозов жвачных, плотоядных и птиц, а также других гельминтозов животных.

Комбинированные методы. Основаны на принципе осаждения и флотации яиц гельминтов, поэтому более эффективны в сравнении с предыдущими методами исследований. Ввиду сложности эти методы сравнительно редко используют в ветеринарных лабораториях.

Метод Дарлинга. Небольшое количество фекалий (1- 2 г) размешивают в стаканчике с 20-30 мл воды, смесь процеживают в центрифужные пробирки и центрифугируют 1-2 мин, после чего верхний слой жидкости сливают, а к осадку доливают смесь равных частей глицерина и натрия хлорида. Смесь в пробирках взбалтывают и вторично центрифугируют. Всплывшие на поверхность яйца снимают вместе с пленкой взвеси проволочной петлей, стряхивают на предметное стекло и микроскопируют. При отсутствии глицерина фекалии можно смешивать перед вторичным центрифугированием с насыщенным раствором натрия хлорида. Этот метод применяют преимущественно при нематодозах свиней.

Метод Щербовича. Техштка исследования фекалий в принципе такая же, как при методе Дарлинга. Отличается от предыдущего метода тем, что перед вторичным центрифугированием к осадку добавляют насыщенные растворы натрия нитрата (при метастронгилезе свиней) и натрия тиосульфата (при макраканторипхозе). Данный метод более эффективен.

Гельминтоларвоскопические методы.

Метод Бермана — Орлова. Для исследования фекалий используют аппарат, состоящий из средней воронки, резиновой трубки (10-15 см длиной), соединенной верхним концом с воронкой, зажима, укрепленного на нижнем конце резиновой трубки, металлического сита или куска марли и штатива (для одного или нескольких аппаратов). Смонтированный аппарат заполняют теплой водой (37-40°). 10- 15 г свежих фекалий кладут па сито или завертывают в марлю и осторожно опускают в воронку (предварительно шарики фекалий лучше разрушать). Фекалии от овец выдерживают в аппарате 2-4 ч; а от телят — не менее 6- 7 ч. Затем зажим на трубке ослабляют, а вытекающую жидкость собирают в пробирку и центрифугируют 2 — 3 мин. После этого верхний слой жидкости сливают быстрым опрокидыванием пробирки, а оставшуюся на дне жидкость переносят на большое предметное стекло (7X10 см) н исследуют под микроскопом.

Многие ветеринарные лаборатории считают, что применение зажимов на резиновую трубку в аппарате Бермана связано с неудобствами.

Поэтому нижние концы резиновых трубок непосредственно соединяют с маленькими или центрифужными пробирками. Перед исследованием осадка под микроскопом жидкость пе центрифугируют. Используют в качестве основного метода для диагностики диктиокаулеза и протостронгилидозов жвачных.

Метод Вайда. Несколько свеже выделенных шариков (4-5) овец или коз помещают в бактериологическую чашку или на часовое стекло и овлажняют их небольшим количеством теплой воды (37-40°). Через 15-30 мин фекалии удаляют, а оставшуюся жидкость исследуют под микроскопом на наличие живых личинок нематод. Эффективность данного метода значительно ниже в сравнении с методом Бермана — Орлова, поэтому его редко применяют для диагностики диктиокаулеза и не используют для распознавания протостропгилидозов мелких жвачных (большинство личинок последних нематод находится внутри фекальных шариков).

Упрощенный ларвоскопический метод. Навеску свежих фекалий овец или крупного рогатого скота (5 г), завернутую в маленькую марлевую салфетку или на ситечке, помещают в полуконический стаканчик емкостью 30-50 мл таким образом, чтобы она не касалась дна, и заливают теплой водой (37-40°). Пробы от овец осторожно извлекают из стаканчиков через 3-4 ч, а от молодняка крупного рогатого скота через 7-10 ч. Спустя 10-15 мин надосадочную жидкость сливают или отсасывают спринцовкой, осадок переносят на большое предметное стекло (7X10 см) и микроскопируют (рис. 3).

С целью ускорения гельментоларвоскопических исследований в последнее время предложена экспресс-диагностика диктиокаулеза овец. Небольшие пробы фекалий (3- 5 г) кладут в пробирки с водой температуры 20-22°, пробирки помещают в центрифугу и центрифугируют в течение 2 мин. Затем пробы вынимают пинцетом, воду сливают до осадка, а осадок микроскопируют на стекле (Г. А. Котельников) .

Гельминтоскопические или макрогельминтоскопические методы. При гельминтоскопии (осмотре) фекалий животных можно обнаружить гельминты или их фрагменты, которые выделяются под воздействием медикаментарных средств или самопроизвольно (мониезий и тизаниезий у жвачных, дрепанидотений у гусей и др.). Чтобы обнаружить более мелких паразитических червей у мелких и средних животных, исследуют методом последовательного промывания всю единовременную порцию фекалий, а у крупных животных — часть фекалий. Собранные фекалии после предварительного осмотра помещают в стеклянный цилиндр или небольшую банку, разбавляют 10-кратным количеством воды и тщательно размешивают. После 10- 15-минутного отстаивания верхний слой жидкости сливают, а осадок снова смешивают с водой и отстаивают.

Периодическое промывание и отстаивание фекалий повторяют до просветления фильтрата. Верхний слой жидкости последний раз сливают, а осадок малыми порциями просматривают в кюветах с черным и белым дном. Обнаруженных гельминтов собирают при помощи пинцетов, препаровальных игл и кисточек, просматривают под микроскопом, после чего переносят в консервирующую жидкость. Чтобы выявить мелких гельминтов, осадок дополнительно исследуют по частям при помощи бинокулярной или штативной лупы с 10-20-кратным увеличением или стереоскопического биологического микроскопа (МБС).

Для ускоренного сбора паразитических червей разной величины из фекалий животных иногда применяют метод отсеивания, для чего используют набор из нескольких металлических сит с отверстиями убывающего диаметра. Фекалии, находящиеся па верхнем сите, промывают струей воды, при этом частицы фекалий уносятся водой, а гельминты в зависимости от величины задерживаются на разных ситах и их выбирают и исследуют.

Количественные методы гельминтокопрологических исследований применяют для установления степени (интенсивности) гельмиитозной инвазии при жизни животных, а также для выяснения эффективности проводимых дегельминтизаций на основании сравнения числа обнаруженных яиц или личинок гельминтов до и после назначения антгельминтиков животным. Наиболее распространенными являются стандартизированные методы Фюллеборна, последовательного промывания и Бермана — Орлова, методика выполнения которых в принципе такая же, как и одноименных качественных гельминтокопрологических методов.

Количественные методы характеризуются рядом особенностей:

  1. взятие навесок экскрементов проводят в определенные часы суток;
  2. стаканчики, воронки и ситечки равного объема или диаметра;
  3. пробы фекалий одинаковые по объему;
  4. время отстаивания взвеси фекалий одно и то же;
  5. петли и предметные стекла одного диаметра (размера);
  6. реактивы идентичные.

Достоверность результатов повышается при использовании набора для гельминтокопрологических исследований и при увеличении количества проб и кратности исследований.

Исследование выделений других органов

  1. Исследование содержимого конъюнктивальных полостей применяют для диагностики телязиоза крупного рогатого скота. Из спринцовки орошают конъюнктивальные полости водным раствором йода; вытекающую жидкость собирают в кюветку или почковидный тазик и осматривают на наличие телязий. В данном случае водный раствор йода оказывает и лечебное действие.
  2. Исследование соскобов с перианальных складок — основной метод диагностики оксиуроза лошадей. Лопатковцдной палочкой или спичкой, смоченной смесью равных частей глицерина и воды, делают соскоб с перианальных складок, промежности и внутренней поверхности корня хвоста. Соскоб переносят па предметное стекло в каплю глицерина с водой, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Обнаружение яиц оксиуров подтверждает клинический диагноз.

Краткая характеристика яиц и личинок гельминтов

Знание морфологических особенностей яиц и личинок паразитических червей является необходимой предпосылкой для прижизненной и дифференциальной диагностики гельминтозов животных.

Яйца гельминтов. Размер яиц у разных видов гельминтов сильно колеблется. Например, самые крупные яйца возбудителя нематодироза жвачных превышают по длине яйца описторха плотоядных в 9-10 раз.

Чтобы отнести яйца гельминтов к определенным группам по величине, целесообразно исходить из следующих ориентировочных размеров их длины:

Яйца представителей разных классов паразитических червей различаются по величине, форме, цвету и строению скорлупы (оболочек) и зрелости (сформирована внутри личинка или нет).

Яйца трематод чаще овальной формы с крышечкой на одном полюсе. Скорлупа гладкая, у некоторых видов она снабжена филамептами (отростками), бугорками. Окраска яиц от светло-серой до коричневой (чаще желтая). Одни виды трематод выделяют яйца незрелые (содержат желточные клетки п оплодотворенную яйцеклетку), другие — зрелые (внутри мирацидий).

Яйца цестод бывают двух типов:

  1. лентецов и
  2. цепней.

У лентецов они напоминают яйца трематод (овальные с крышечкой). Яйца цепней резко отличаются по строению от яиц гельминтов других классов: они чаще средней величины, округлой формы, серого цвета, зрелые (внутри зародыш — онкосфера с тремя парами эмбриональных крючьев).

Яйца скребней имеют овальную, эллипсоидную и веретенообразную формы; размер их от среднего до крупного.

Выделяемые во внешнюю среду яйца содержат внутри личинку — акаптор с очень мелкими эмбриональными крючочками на одном из полюсов (зрелые).

Яйца нематод отличаются от яиц трематод отсутствием крышечки; от яиц цестод — отсутствием онкосферы. Размеры, форма, строение и цвет скорлупы яиц нематод очень разнообразны. Наружная оболочка гладкая, бугристая, ячеистая; толщина скорлупы варьирует от тонкой (у стронгилят) до толстой (у триходефалов). У большинства нематод яйца овальной формы, у некоторых — круглые (у параскариды). Большинство нематод выделяют наружу незрелые яйца на предсегментационной стадии или нескольких шаров дробления, меньшинство — зрелые (внутри яйца сформирована личинка).

Яйца паразитических червей надо дифференцировать от органических включений (спор крахмальных зерен, грибов, пыльцы растений и др.), яиц клещей и других включений. Основные отличительные признаки яиц гельминтов: структурность скорлупы (чаще сложного строения, нередко наличие крышечки, пробочек) и внутренняя организация яйца (зародыш на разных стадиях развития). Яйца клещей в большинстве случаев значительно крупнее яиц гельминтов.

Личинки нематод. Руководствуясь описанными выше методами прижизненной диагностики гельминтозов личинок одних круглых червей: обнаруживают в свежевыделенных фекалиях жвачных (диктиокаулов и протостронгнлид), других — в полежавших не менее 16 ч во внешней среде фекалиях жвачных, а также лошадей, свиней, собак и птиц (желудочно-кишечных стронгилят), третьих — в коже крупного рогатого скота и лошадей (микроонхоцерков), четвертых — в крови лошадей и крупного рогатого скота, пятых — в мышцах уха свиней п плотоядных (мышечных трихинелл).

Живые личинки нематод удлиненной формы, серого цвета, обладают подвижностью. Их различают по длине и толщине тела, форме головного и хвостового концов, особенностям внутреннего содержимого и активности движения.

Для дифференциации личинок легочных и кишечных нематод жвачных применяют метод окраски по Буланову. Несколько капель осадка, подготовленного к исследованию одним из методов ларвоскопии, наносят на большое предметное или часовое стекло (7XJ0 см) и добавляют 1 — 2 капли 0,1%-ного водного раствора метиленового синего. Влажный препарат встряхивают и через 80 с исследуют под микроскопом. Личинки диктиокаулов окрашиваются в сиреневый цвет различных оттенков, растительные остатки — в зеленый, а личинки кишечных и других нематод остаются неокрашенными. Учитываются также характерные морфологические признаки личинок некоторых видов круглых червей.

Диагностическая дегельминтизация

Под диагностической дегельминтизацией понимают такое вмешательство, при котором достигается выделение из желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных хотя бы части паразитических червей для точного установления гельминтологического диагноза. Данную дегельминтизацию проводят в тех случаях, когда клинические признаки дают основание заподозрить наличие болезни у животных, вызванной неполовозрелыми гельминтами.

Для диагностической дегельминтизации выделяют несколько животных, изолируют от остального поголовья и задают им антгельминтик в терапевтической дозе. Выделенные в течение нескольких часов фекалии от животных собирают и исследуют гельментоскопически на предмет обнаружения возбудителя болезни.

В производственных условиях такие дегельминтизации нередко проводят для прижизненной диагностики цестодозов (мипиезиоза жвачных, дрепанидотениоза гусей и цестодозов плотоядных).

Иммунологические реакции

Гельминтологические методы исследований часто оказываются неэффективными при гельминтозах сельскохозяйственных животных, вызванных неполовозрелыми паразитами и личиночными стадиями паразитических червей (эхинококками, альвеококками, цистицерками, мышечными трихинеллами, микроонхоцерками). Поэтому некоторое практическое значение имеют иммунологические методы диагностики гельминтозов, базирующиеся на явлениях иммунитета. Иммунологические реакции проявляются при взаимодействии антигена с антителами. Они включают аллергические и серологические реакции.

Методы иммунодиагностики более эффективны при тех гельминтозах, возбудители которых паразитируют в тканях (цистицерки, личиики эхинококков, трихинелл, онхоцерков и др.) или мигрируют по крови (личинки аскарид, диктиокаулов, метастронгилов и др.). Из серологических реакций заслуживают внимания реакция сколексопреципитации, позволяющая диагностировать ларвальный эхинококкоз, и реакция преципитации, способствующая распознаванию трихинеллеза и аскаридоза свиней.

Из аллергических методов иммунодиагностики некоторый интерес представляет кожная проба (реакция Кацопи) при эхинококкозе животных. Иногда эта реакция может представлять потенциальную опасность для здоровья обследуемого животного (возможен анафилактический шок). Несмотря на эффективность и перспективность иммунологических методов диагностики ряда гельминтозов, их в настоящее время еще редко применяют в производственных условиях.

К другим исследованиям, которые имеют подсобное значение в установлении или уточнении диагноза на гельминтозы, можно отнести люминесцентную микроскопию, помогающую дифференцировать однотипные яйца разных видов паразитических червей, а также отличать жизнеспособные яйца и личинки от мертвых; определение белковых фракций крови (учет нарушения соотношения альбумипов и глобулинов); выяснение морфологического состава крови (учет эозинофилии).

Клинические признаки

Клиническая карта гельминтозов сельскохозяйственных животных изучена слабо, а симптомокомплекс заболеваний, вызываемых паразитическими червями, довольно однообразен (угнетение, поносы, исхудание и др.), поэтому она играет подсобную роль при диагностике большинства этой группы заболеваний. Однако при ряде гельминтозов животных наблюдают характерные клинические симптомы:

  • нервные явления (при ценурозе овец),
  • конъюнктивит и кератит (при телязиозе крупного рогатого скота),
  • кожные кровотечения (при парафиляриозе лошадей).

Эти заболевания можно диагностировать с известной долей достоверности на основании клинических наблюдений.

При большинстве других гельминтозов такие нехарактерные симптомы, как низкая упитанность и продуктивность взрослых животных, отставание в росте п развитии молодняка, должны служить поводом для проведения гельминтокопрологических и других специальных обследований животных, подозреваемых в заболевании гельминтозами.

Эпизоотологические данные

При диагностике многих гельминтозов сельскохозяйстгвенных животных значительную помощь оказывают эпизоотологические данные (неблагополучие хозяйства по конкретным болезням, сезон года, возраст больных животных, характер пастбищ и водоисточников, метеорологические условия и др.).

Например, массовое заболевание с признаками брюшных водянок и падеж овец осенью после дождливого лета и использование под выпасы заболоченных участков пастбищ дает основание заподозрить острую форму фасцполеза. Заболевание гусят в начале лета с признаками расстройства пищеварения (поносы) и нервной системы (парезы) после выпаса их на мелком стоячем водоеме, обильно заселенном циклопами, является основанием для установления предположительного диагноза на дрепанидотениоз. Падеж ягнят весной (через 3-4 недели после начала пастбищного содержания) должен вызвать подозрение о заболевании молодняка овец мониезиозом.

Необходимо также учитывать зональные особенности гельмиптозов домашних животных желательно в комплексе с клиническими наблюдениями.

← ПОСМЕРТНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ

Методы прижизненной лабораторной диагностики гельминтозов:

— гельминтокопрологические исследования;

— гельминтоовоскопические исследования;

— гельминтоларвоскопические исследования;

— иммунобиологическая диагностика;

— диагностическая дегельминтизация и другие методы;

Методы посмертной диагностики:

— патологоанатомические исследования;

— полные и неполные гельминтологические вскрытия органов и тканей (ПГВ и НПГВ).

Прежде чем перейти перечисленных выше вопросов данной темы, считаю уместным дать определение понятия «инвазия» и «инвазионные болезни».

Итак, «инвазия» (от лат. invasio – нападение, вторжение) – это заражение человека, животного и растений паразитами животного происхождения. Нередко её отождествляют с понятием «инвазионная болезнь», для возникновения которой, кроме возбудителя необходимы следующие условия: восприимчивость заражённого животного, вирулентность возбудителя, соответствующее влияние внешней среды в период развития паразита и др.

Инвазионные болезни могут протекать как в клинически выраженной форме со значительной смертностью, так и в скрытой (латентной) форме.

В зависимости от вида возбудителя инвазионного заболевания различают: протозоозы (вызываемые простейшими), гельминтозы (паразитическими червями – Scolecidae), арахнозы (вызываемые паукообразными, в том числе клещами) и энтомозы (вызываемые насекомыми).

В диагностике инвазионных болезней решающее значение имеют лабораторные исследования, в результате которых устанавливается возбудитель.

Рассмотрим методы прижизненной диагностики гельминтозов. Для этого используют как макро- , так и микроскопические исследования, прежде всего фекалий, мочи, крови,, дермы, содержимого полостей организма и др. Эти методы гельминто-диагностических исследований, направленные на отыскание и изучение самих гельминтов, их фрагментов Илии яиц и личинок наиболее доказательны и широко применяются для диагностики гельминтозов.

Материал для диагностических исследований должен быть свободен от всяких посторонних примесей и загрязнений, фекалии рекомендуется брать из прямой кишки животного , они должны быть свежими, их следует держать на холоде ( не >5оС), можно также консервировать 5-10 % раствором формалина или карболовой кислоты.

Гельминтоскопия – применяется для обнаружения в фекалиях целых экземпляров гельминтов или их фрагментов, особенно при исследовании на цестодозы кишечника. Этот метод используется также для контроля эффективности проведённой дегельминтизации, для учёта количества изгнанных гельминтов. Для этих исследований необходимо брать всю единовременную порцию фекалий, а с целью учёта эффективности дегельминтизации следует собирать все экскременты, выделенные животным в течение 2-4 суток после обработки. Собранные фекалии предварительно осматривают невооружённым глазом. Затем их помещают в металлический сосуд, разбавляют 5-10 кратным количеством воды, перемешивают и дают некоторое время отстояться, затем верхний слой сливают (до осадка) и снова добавляют воду. Эти манипуляции последовательного промывания и отстаивания проделывают несколько раз. Полученный осадок небольшими порциями исследуют в кюветках (чашках Петри) на белом и чёрном фоне. Всех видимых гельминтов выбирают иглой и исследуют под микроскопом, устанавливая вид.

Гельминтоовоскопия – это методы диагностики гельминтозов в результате обнаружения в материале яиц гельминтов. Для проведения таких исследований применяют следующее оборудование и средства: микроскоп биологический, предметные стёкла, чашки Петри, стакана стеклянные или пластмассовые (диаметром не > 4-5 см), мензурки объёмом 50 мл , фильтрационные ситечки (с капроновой сеткой, чулочной), стеклянные палочки, металлические петли с диаметром кольца 8-10 мм.

Для диагностических исследований используют флотационные растворы. Наилучшей флотационной способностью обладают растворы при температуре 20-22оС. Плотность раствора уточняем денсиметром. Насыщенный раствор технической селитры или аммония нитрата с плотностью 1,32 (1500 г на 1 литр кипящей воды); натриевой селитры или натрия нитрата с плотностью 1,38 (соотношение соли и горячей воды 1:1); магния сульфата (сернокислая магнезия )с плотностью 1,26-1,28 (920 г на 1 литр горячей воды); натрия тиосульфата или гипосульфита натрия, плотностью 1,38-1,40 ( 1750 г на 1 литр кипящей воды); сульфат цинка плотностью 1,24 ( 400 г на 1 литр воды); поваренная соль, плотностью 1,2 (400 г соли в 1 литре воды нагревают до кипения), применяют в холодном состоянии.

Самый простой метод гельминтоовоскопического исследования фекалий – это метод нативного мазка. Небольшой кусочек фекалий помещают на предметное стекло, добавляют 2-3 капли смеси равных частей глицерина и воды, тщательно смешивают, покрывают покровным стеклом и смотрят под микроскопом. Этот метод ненадёжный, так как при слабой инвазии даёт отрицательный результат.

Метод последовательного промывания (метод осаждения, седиментации) применяют для диагностики трематодозов животных, яйца возбудителей которых имеют большой удельный вес и не улавливаются методом всплывания (флотации). Берут 5 г фекалий, смешивают с10 кратным количеством воды, фильтруют через сито или марлю и фильтрат отстаивают 5 минут. Далее жидкость сливают, а к осадку добавляют чистую воду и снова отстаивают 5 минут. До тех пор пока жидкость не станет прозрачной. Жидкость сливают, а осадок исследуют под микроскопом на наличие трематод.

Для диагностики нематодозов и цестодозов чаще всего используют флотационные методы. Наиболее распространённый и чаще применяемый – метод Фюллеборна. Для этого берут 10-20 г фекалий, помещают его в банку или стакан ёмкостью 100-200 мл, тщательно растирают стеклянной или деревянной палочкой в насыщенном растворе поваренной соли. Общее количество добавляемого раствора должно быть примерно в 20 раз больше количества фекалий. Затем фильтруем и оставляем на 30 минут. С поверхности отстоявшейся жидкости металлической петлёй снимаем плёнку и переносим её на предметное стекло, покрываем покровным стеклом и исследуем под микроскопом. Метод Щербовича используют для обнаружения яиц с более высокой плотностью (например, яйца метастронгилид), для чего используют насыщенный раствор сернокислой магнезии. Пробу фекалий (3-5 г) размешивают в воде до получения равномерной взвеси. Фильтруем через ситечко в центрифужную пробирку и центрифугируем 1-2 минуты. Верхний слой сливают, а к осадку добавляют насыщенный раствор сернокислой магнезии, хорошо размешиваем и снова центрифугируем 1-2 минуты. Затем металлической петлёй снимают верхнюю плёнку, помещают её на предметное стекло, накрывают покровным и исследуем под микроскопом.

Метод Котельникова и Хренова. Пробу фекалий (3 г) кладут в стакан и заливают небольшим количеством насыщенного раствора аммиачной селитры, размешиваем стеклянной (деревянной) палочкой и добавляем раствор до 50 мл. Взвесь фильтруем в другой стакан и оставляем на 10-15 минут. Снимаем петлёй 3-4 капли с поверхности, переносим их на предметное стекло и микроскопируем под малым увеличением микроскопа. Обнаруживаем яйца аскарид, трихоцефал, эзофагостом, стронгилоидесов, метастронгилид, неоаскарид, стронгилят органов пищеварения, мониезий и тизаниезий, параскарид, токсокарисов и др.

Метод Н.В. Демидова для диагностики фасциолёза. Пробу фекалий (3г от овец, 5 г от крупного рогатого скота), помещают в стакан, наливают насыщенный раствор хлористого натрия, тщательно размешиваем стеклянной палочкой, отстаивают 15-20 минут. С поверхности удаляют крупные частицы; жидкость отсасывают спринцовкой, или осторожно сливают, оставляют примерно 20-30 мл, к осадку добавляют воду до полного объёма стакана, тщательно размешивают, фильтруют через сито или 1 слой марли; жидкость снова отсасываем, оставляя 15-20 мл осадка; осадок переливают в маленькие конические стаканы, отстаиваем 3-5 минут, жидкость отсасываем и на предметное стекло переносим осадок, исследуя его под малым увеличением микроскопа.

Метод Дарлинга комбинирует процедуры осаждения и флотации. Фекалий смешивают с водой и центрифугируют 3-5 минут. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку прибавляют жидкость Дарлинга (глицерин с насыщенным раствором хлористого натрия, 1:1), тщательно размешивают и вторично центрифугируют 3-5 минут. Металлической петлёй снимаем плёнку на предметное стекло, накрываем покровным и исследуют.

Есть ещё много модифицированных методов исследования с целью обнаружения яиц гельминтов. Существуют стандартизированные методы Фюллеборна, Щербовича и др. При всех исследованиях берут одинаковую посуду, одно и то же время отстаивают и центрифугируют пробы, пользуются петлями одинакового диаметра и, сравнивая число яиц в поле зрения микроскопа или в одной капле поверхностной плёнки до и после обработки животных, судят об эффективности проведённой дегельминтизации. Наиболее простой и достаточно точной является методика, предложенная М.Ш.Акбаевым с использованием сетки, изготовленной из фотоплёнки после рентгеновских снимков. Кроме того, используются количественные гельминтоовоскопические исследования.

Метод Стола. В 100 мл колбочку наливают вначале 56 мл воды и отмечают снаружи на уровне её мениска. Потом наливают ещё 4 мл воды и делают новую отметку. Воду выливают, а в градуированную колбочку наливают 56 мл 0,1н раствора едкого натра, добавляют столько фекалий, чтобы уровень жидкости достиг отметки 60 мл . (4 см3 фекалий), всыпают 10-15 бусинок, тщательно взбалтывают. Сразу же после взбалтывания градуированной пипеткой набирают 0,075 мл или 0,1 мл смеси, наносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом, подсчитывая число яиц гельминтов. Количество яиц в 1 см3 (1 г) фекалий, найденное число яиц умножают на 200 (если исследовали 0,075 мл смеси) или на 150 (если 0,1 мл смеси).

Гельминтоларвоскопические исследования применяются для диагностики диктиокаулёза, мюллериоза и др. протостронгилидозов, а также стронгилятозов пищеварительного тракта жвачных и стронгилоидозов разных животных.

Метод Бермана и Орлова.10 г фекалий помещают в воронки аппарата Бермана на металлической сетке или завёрнутые в кусочки марли. Заливают водой комнатной температуры и оставляют на 3-6 часов. За это время личинки выползают из пробы в жидкость и опускаются по трубке на дно пробирки. Жидкость из пробирки сливают и отсасывают. Осадок после встряхивания разливают на предметное стекло и микроскопируют при малом увеличении микроскопа. Личинки нематод подвижны и легко обнаруживаются.

Упрощённая модификация метода Бермана (по Шильникову). В стакан с водой кладут пробы фекалий и завёрнутые в марлевые салфетки. Через 3-6 часов пробы вынимают, жидкость отстаивают 10-15 минут, затем пипеткой отсасывают прозрачный слой воды. Затем каплю осадка пипеткой наносят на предметное стекло для микроскопии.

Метод седиментации с центрифугированием. (экспресс-методика по Котельникову и др.). 3-5 г фекалий кладут в пробирки с водой (20-25оС) и центрифугируют (1000-1500 оборотов в минуту) 2 минуты. Затем воду сливаем, а осадок, встряхнув, выливают на предметное стекло и исследуют на наличие личинок.

Метод Вайда. На предметное или часовое стекло кладут несколько шариков фекалий от овец, коз и добавляют воды температурой 40оС. Через 4о минут шарики удаляют и исследуют под микроскопом жидкость, оставшуюся на стекле на наличие личинок нематод. Обнаруженных разными методами личинок необходимо дифференцировать.

Исследование крови по Куликову. Из ярёмной вены набирают 20 мл крови и добавляют 2 мл 3,8 % водного раствора лимонно-кислого натрия и отстаивают в течение 20-25 минут. Образуется 3 слоя: нижний – осевшие эритроциты, средний – лейкоциты и личинки нематод и верхний – сыворотка. Тонкой пипеткой, берут содержимое среднего слоя, наносят его каплями на предметное стекло, накрывают покровным и смотрят под микроскопом.

Исследование крови крупного рогатого скота (по Стюарду). Кожу освобождаем от волос, место дезинфицируем. Пинцетом оттягиваем кожу и кривыми ножницами отрезают поверхностный слой. Помещают на предметное стекло в каплю физраствора и тщательно расщепляют препаровальными иглами. Жидкость исследуют под микроскопом.

Исследование кожи лошадей по Р.С.Чеботарёву. На холке, плече, других местах выбирают участок кожи размером 5 см2, дезинфицируем спиртом. Захватываем кожу в складку, отрезаем кусочек толщиной 3-4 мм и площадью 2-3 см2. Срезы помещают в пробирке и заливают 2-3 мл физраствора и оставляют на несколько часов в термостате при 36-37оС или при комнатной температуре. Затем содержимое пробирки выливаем на часовое стекло и исследуют под микроскопом, с целью обнаружения личинок онхоцерков.

Иммунобиологическая диагностика. В практике используют аллергические реакции для диагностики тканевых гельминтозов или, так называемых, ларвальных цестодозов, таких как эхинококкоз, ценуроз, цистицеркозы, а также нематодозов как трихинеллёза. Для этого применяют внутрикожную пробу. В качестве антигена рекомендуют жидкость из личинок (пузырей) или экстракты из трихинелл и их личинок.

В настоящее время большое внимание уделяют разработке и использованию серологических реакций, используя в качестве антигенов живых личинок гельминтов. По этому принципу ставят реакции микропреципитации на живых личинках нематод при нематодозах, на церкариях — при трематодозах, на онкосферах и сколексах — при ларвальных цестодозах. Другой принцип серологических реакций связан с использованием соматических антигенов. Применяют реакции гемагглютинации и флоккуляции (агглютинации) с адсорбированными антигенами. В качестве адсорбентов используют кармин, бентонит и латекссинтетическая смола.

Разновидностью серологических реакций являются: реакция сколексопреципитации (РСкП), разработанная Р.С.Шульц и Р.Г.Исмагиловой для диагностики эхинококкоза овец. Другие реакции: РНГА, РЗГА и др.

Диагностическая дегельминтизация является методом макрогельминтоскопи-ческого исследования. Используют её при подозрении на мониезиоз, тизаниезиоз, авителлиноз жвачных, аноплоцефалидозы лошадей, тениидозы плотоядных, дрепанидотениоз водоплавающих птиц, аскаридоз свиней, аскаридиоз кур и др. небольшой группе животных; наиболее подозрительных в заболевании, вводят соответствующий антгельминтик в лечебной или заниженной дозе. За животными наблюдают и проверяют все выделенные экскременты с целью обнаружения гельминтов или их фрагментов, которые в дальнейшем исследуют.

И, наконец, методы исследования других органов.

Исследование мочи: при диоктофимозе почек, капилляриозе мочевого пузыря. Мочу следует предварительно просмотреть макроскопически или при помощи лупы на наличие гельминтов или их фрагментов. Мочу разбавляют пополам дистиллированной водой и центрифугируют 2-3 минуты, жидкость сливают, а осадок наносят на предметные стёкла и исследуют.

Исследование содержимого трахеи птиц: в ней хорошо видны сингамусы или циатостомы, которые обычно имеют яркокрасный цвет.

Исследование содержимого конъюнктивальных полостей: прижизненная диагностика телязиоза крупного рогатого скота (Th. Rhodesi). Исследователь надавливает пальцем в области внутреннего угла глаза, затем приподнимает пинцетом или векодержателем третье веко. Обнаруживаем живых и подвижных паразитов. Кроме того, можно применить ирригацию глаз крупного рогатого скота из резиновой спринцовки 3-х % раствором борной кислоты. Исследуют вытекающую в кюветку жидкость (телязии).

Исследование камеры глаза. Прижизненная диагностика сетариоза глаз лошадей и крупного рогатого скота — проводят макроскопическим исследованием передней камеры поражённого глаза, где можно видеть свободноплавающих сетарий (5-10 см) и хорошо просвечивает даже через помутневшую роговицу.

Исследование поверхностного соскоба с перианальных складок: палочку или спичку, смоченную 50 % водным раствором глицерина делают соскоб с перианальных складок с внутренней стороны корня хвоста и с области промежности. Соскоб переносят на предметное стекло в 2-3 капли глицерина (1:1 в воде), покрываем покровным стеклом и исследуем под микроскопом на наличие яиц оксиурат.

Методы посмертной диагностики гельминтозов

— патологогистологические исследования. Посмертная диагностика гельминтозов различных стадий их развития в органах и тканях животных. Наиболее совершенная методика гельминтологического вскрытия разработана К.И.Скрябиым. Различают полное и неполное гельминтологическое вскрытие.

Полное гельминтологическое вскрытие – наиболее надёжный метод, позволяющий производить как количественный, так и качественный учёт всех гельминтов, которыми инвазировано животное.

Суть данного метода: после снятия с трупа кожи, тщательно осматривают подкожную клетчатку, затем вскрывают грудную и брюшную полости и извлекают все органы систем: пищеварительную, дыхательную систему, кровеносную, мочеполовую и др.

Органы отделяют и исследуют порознь, при этом используют метод последовательных смывов. Паренхиматозные органы (печень, лёгкие, поджелудочная железа, почки и др.) помещают в отдельную посуду и превращают в фарш, разрывая руками или разрезая на мелкие кусочки ножом или ножницами. Далее этот детрит отмывают водой или физраствором, пользуясь методом последовательных смывов. Полученный осадок изучают небольшими порциями сначала в чёрных, а затем в белых кюветах или в чашках Петри на чёрном и белом фоне. Крупных гельминтов выбирают визуально, а мелких – при помощи ручной лупы с 8-10-кратным увеличением. Собирают гельминтов только кисточкой или препаровальными иглами, но не пинцетом и непальцами.

НПГВ – упрощённое гельминтологическое вскрытие, в процессе которого извлекают из органов и тканей лишь отдельных резко выделяющихся по размерам гельминтов. Его используют также для получения музейного материала.

Гистологические исследования проводят с целью изучения деструктивных изменений при отдельных паразитозах.

Естественно, что это далеко не все методы лабораторной диагностики паразитозов. Самые современные методы основаны на электропроводимости тканей организма и гельминтов; на основе биохимических процессов, происходящих в организме животных профилактики инфекционных, инвазионных и незаразных болезней животных при воздействии тех или иных паразитов и т.д.